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申请/专利权人：华南理工大学
摘要：本发明公开了一种用于制备结直肠癌免疫治疗双特异性抗体的交联方法。该方法以高碘酸纳氧化法针对抗CD19抗体上的糖基和抗DHX9抗体氨基进行交联反应制备双特异性抗体，并用亚硫酸钠还原，最后透析除去游离小分子。在聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化后验证产率后，通过尾静脉注射法向用MC38细胞荷瘤的C57BL6小鼠定期注射，并每日记录皮下瘤大小以评估双特异性抗体疗效。本发明利用抗体保守位点上的糖基针对另一抗体游离氨基交联，交联产率高，特异性好，副产物率低，产物对细胞无害。
主权项：1.一种用于制备结直肠癌免疫治疗双特异性抗体的交联方法，其特征在于，包括以下步骤：1根据所选的小鼠种属选择适宜抗CD19抗体和抗DHX9抗体型号，根据两者分子量及分子外围游离氨基位点计算每批次抗体用量、高碘酸钠用量、亚硫酸钠用量比例以及理论交联产物分子量范围；2将抗CD19抗体溶于的醋酸溶液中并用饱和高碘酸钠溶液混合反应；3抗DHX9抗体溶于碳酸钠缓冲液后加入步骤2中反应后体系混匀，室温下避光反应；4向步骤3中反应后体系中加入亚硫酸钠溶液，混匀后0-4℃下静置反应；5样品取10-15μL用于聚丙烯酰胺凝胶电泳，将反应后体系分离验证是否交联成功；6将步骤2中反应出现的产物条带根据步骤1中计算得到的理论产物分子量范围进行切割；7将6中切割得到的凝胶块用切胶回收试剂盒回收，用PBS重新溶解，得到清亮的蛋白质溶液，并用BSA蛋白定量试剂盒测定蛋白质含量，以计算交联反应产量产率；8对4中反应后体系用PBS做透析，4℃下过夜，回收定容。
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百度查询： 华南理工大学 一种用于制备结直肠癌免疫治疗双特异性抗体的交联方法
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