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申请/专利权人：中山市珈钰生物医药有限公司;深圳市珈钰生物科技有限公司

摘要：本发明提供了一种同种异体树突细胞肿瘤疫苗及其制备方法和应用，属于肿瘤细胞疫苗技术领域。一种同种异体CAR树突细胞肿瘤疫苗，重组表达有嵌合抗原受体和肿瘤疫苗的同种异体树突细胞。本发明采用同种异体树突细胞为基础细胞，同种异体细胞用于细胞治疗具有扩大细胞来源和提高细胞质量以及缩短细胞准备时间的特点；同时本发明验证了同种异体CAR树突细胞肿瘤疫苗用于治疗肿瘤的有效性和安全性，该疫苗开发克服了长久以来细胞疗法依赖于自体细胞的局限性，有利于扩大CAR‑DC的治疗应用和规模，提高细胞制备的质量，为实体瘤的攻克提供一种新的策略和应用。

主权项：1.一种同种异体CAR树突细胞肿瘤疫苗，其特征在于，重组表达嵌合抗原受体和肿瘤疫苗的同种异体树突细胞；所述同种异体树突细胞为来源于用于细胞治疗的相同物种的不同个体的树突细胞；所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示；所述肿瘤疫苗的来源基因为：TP53和或KRAS；所述肿瘤疫苗选自p53R273H突变肽和或KRASG12V突变肽；所述p53R273H突变肽的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；所述KRASG12V突变肽的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示；所述同种异体CAR树突细胞肿瘤疫苗的制备方法，包括以下步骤：构建含编码嵌合抗原受体和肿瘤疫苗的基因序列的重组慢病毒载体；用所述重组慢病毒载体进行慢病毒包装，得到重组慢病毒；将所述重组慢病毒感染同种异体树突细胞或其前体细胞或其祖细胞，得到或经培养得到同种异体CAR树突细胞肿瘤疫苗；所述异体树突细胞从健康人的外周血PBMC分离CD14细胞而来，具体步骤为，PBMC计数，使用CD14磁珠孵育PBMC细胞，4℃，15分钟，孵育完成后MACS缓冲液洗涤一次，将细胞通过预润洗的磁柱，缓冲液冲洗柱子3次，每次3mL缓冲液，冲洗完成后，将磁柱从磁力架取下，使用5mL缓冲液将细胞冲下，收集细胞；所述MACS缓冲液由EDTA-PBS和2％FBS组成；所述PBMC来源同种异体单核细胞分化成人树突状细胞；所述重组慢病毒载体中包含表达编码嵌合抗原受体和肿瘤疫苗的基因序列的表达元件；所述表达编码嵌合抗原受体和肿瘤疫苗的基因序列的表达元件包括启动子、编码嵌合抗原受体的基因、表达调控元件和编码肿瘤疫苗的基因；所述启动子包括EF1A；所述EF1A的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示；所述编码嵌合抗原受体的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；所述编码肿瘤疫苗的基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2或SEQIDNO:3所示；所述表达调控元件包括IRES；所述IRES的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示。

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