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申请/专利权人：贵州中医药大学

摘要：本发明公开了黑龙骨茎叶一种黑龙骨茎叶质量测定方法，所述方法包括指纹图谱建立及相似度分析、含量测定、结合聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析方法。本发明方法是对15批不同产地黑龙骨茎叶进行UPLC指纹图谱分析和相似度分析，发现共有28个共有峰，并用对照品指认其中7个共有峰，分别是峰4新绿原酸、峰8绿原酸、峰9咖啡酸、峰11隐绿原酸、峰22异槲皮苷、峰24紫云英苷、峰28异绿原酸C。本发明方法灵敏度高、专属性好，稳定可行，为黑龙骨茎叶质量评价及控制提供参考依据。

主权项：1.一种黑龙骨茎叶质量测定方法，其特征在于：黑龙骨茎叶质量测定方法包括指纹图谱建立及相似度分析、含量测定、结合聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析方法，具体的步骤如下：1混合对照品溶液的制备：精密称取14.5-16.5mg新绿原酸、11.5-13.5mg绿原酸、11.5-13.5mg隐绿原酸置于10ml容量瓶中，加入75％乙醇溶液定容至刻度，摇匀，配制成混合对照品溶液①；另外精密称取2-4mg咖啡酸、4.5-6.5mg异槲皮苷、4-6mg紫云英苷、7.5-9.5mg异绿原酸C置于50mL容量瓶，加入75％乙醇至刻度，摇匀，配制成混合对照品溶液②；从混合对照品溶液①和合对照品溶液②中各吸取1ml置于同一10ml的容量瓶中，加入75％乙醇溶液定容至刻度，摇匀，配制成混合对照品溶液③；2供试品溶液的制备：精密称取黑龙骨茎叶样品0.4-0.6g，置于20ml锥形瓶中，加入75％乙醇10mL，精密称重，超声提取20-40min，放冷，补足失重，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液；3色谱条件：采用AgilentEclipsePlusC18色谱柱，色谱柱规格为2.1×100mm,1.8μm，体积流量0.2mLmin，乙腈为流动相B，0.1％磷酸水为流动相A，进行梯度洗脱，进样量0.8μL，柱温30℃，检测波长为1-49min，327nm；49-70min，254nm；70-85min，327nm；4指纹图谱建立及相似度分析：将不同产地黑龙骨茎叶的供试品溶液分别在色谱条件下进行UPLC测定，将样品色谱图转换为AIA格式，数据导入2012版中药色谱指纹图谱相似度评价系统，将第一批次样品图谱作为参照图谱，时间窗宽设置为0.1，利用多点校正，经过marker峰匹配，生成黑龙骨茎叶指纹叠加图谱和对照图谱，并进行相似度计算，得到共有峰；再另取混合对照品溶液③在色谱条件下进样测定，得到对照品色谱图，通过对照品色谱峰及紫外吸收波长对比，指认特征峰，建立指纹图谱；5含量测定：采用超高效液相色谱法，将供试品溶液和混合对照品溶液③分别在色谱条件下进行检测，有效分离黑龙骨茎叶中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、紫云英苷和异绿原酸C，记录峰面积，并计算供试品中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、紫云英苷和异绿原酸C的含量；6结合聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析对不同产地黑龙骨茎叶进行分析。

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