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申请/专利权人：江西农业大学
摘要：本发明公开了一种基于非经典型sgRNA的Cas12b与LAMP融合的ASFV检测方法及应用，涉及ASFV检测技术领域，本发明基于CRISPR‑Cas系统在病毒核酸检测技术方面的应用，建立了一种基于CRISPR‑Cas12b与环介导等温扩增LAMP方法相结合的ASFV核酸检测技术。该检测方法区别以往利用经典型sgRNA切割能力强，首次通过非经典型sgRNA，减弱对靶DNA切割，提高低丰度病原的检测能力，而且灵敏度高、特异性强、便捷、省时以及对实验设备和操作人员的要求低。与目前主流的实时荧光定量PCR检测方法相比，在检测的用时、检测的准确度、操作的简易性以及检测成本等方面都具有一定的优势。
主权项：1.一种基于非经典型sgRNA的Cas12b与LAMP融合的ASFV检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：构建ASFV的P1192R基因的重组质粒pUC57-P1192R；S2：针对P1192R基因，设计筛选LAMP特异性引物；S3：以pUC57-P1192R的稀释质粒为模板，在PCR中采用LAMP特异性引物进行LAMP扩增反应，获得优化的LAMP反应体系；S4：制备Aapcas12b蛋白；S5：设计并制备非经典sgRNA；S6：将Aapcas12b蛋白和非经典sgRNA加入步骤S3中的优化LAMP反应体系中，进行荧光切割反应检测。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 江西农业大学 一种基于非经典型sgRNA的Cas12b与LAMP融合的ASFV检测方法及应用
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