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申请/专利权人：杨凌职业技术学院
摘要：本发明公开了一种分离外被体蛋白I包被囊泡的方法，具体包括以下步骤：先将细胞消化后接种于细胞培养瓶中，清洗，加入等渗液，离心，加入等渗液，依次通过21号针头和27号针头，三次离心，离心浓缩，得到细胞裂解浓缩液；然后将ProteinAG免疫磁珠在磁力架上静置，加入等渗液，静置，加入等渗液稀释的Anti‑COPα抗体，涡旋混匀，孵育，静置，加入等渗液，洗涤，加入细胞裂解浓缩液，孵育，静置，加入等渗液，洗涤；最后加入重组COPα蛋白溶液，孵育，静置，收取囊泡洗脱液，即得。本发明获得了保持原有特征和功能的内源性外被体蛋白I包被囊泡，有利于在真实的细胞环境下对其物质转运功能和转运成分进行研究、鉴定。
主权项：1.一种分离外被体蛋白I包被囊泡的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1将细胞消化后接种于细胞培养瓶中，弃去细胞培养基，清洗，加入等渗液；2将细胞刮下，离心，弃去上清液，加入等渗液，得到细胞悬液；3将细胞悬液依次通过21号针头和27号针头，直至在显微镜下观察不到完整的细胞结构，得到细胞裂解液；4将细胞裂解液进行第一次离心，收集上清；将收集的上清进行第二次离心，再次收集上清；将收集的上清进行第三次离心，得到上清液；5将上清液装入超滤管，离心浓缩，得到细胞裂解浓缩液，储存，备用；6将ProteinAG免疫磁珠在磁力架上静置，加入等渗液，颠倒混匀洗涤，在磁力架上再次静置，得到磁珠沉淀；7将Anti-COPα抗体用等渗液稀释，加入磁珠沉淀中，涡旋混匀，孵育，得到抗体-磁珠复合物；8将抗体-磁珠复合物在磁力架上静置，弃去上清，加入等渗液，颠倒混匀洗涤，加入细胞裂解浓缩液，孵育，得到囊泡-抗体-磁珠复合物；9将囊泡-抗体-磁珠复合物在磁力架上静置，弃去上清，加入等渗液，颠倒混匀洗涤，加入重组COPα蛋白溶液，孵育，在磁力架上再次静置，收取囊泡洗脱液，即得。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 杨凌职业技术学院 一种分离外被体蛋白I包被囊泡的方法
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