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申请/专利权人：北京实验动物研究中心有限公司
摘要：本申请提供一种用于靶向小鼠LMNA基因的gRNA、对小鼠进行基因敲除的方法以及LMNA基因敲除的小鼠模型的构建方法。其中，所述方法包括利用基因编辑技术，破坏小鼠的LMNA基因的第二外显子区域。本申请设计了特异性靶向小鼠LMNA基因的两条gRNA，利用Cas9蛋白将LMNA基因的第二外显子敲除，造成移码突变，从而达到对小鼠进行基因敲除的目的。本申请对小鼠基因改造的方法简单易行，周期短，利用该方法构建的小鼠模型可以充分研究LMNA基因在衰老等疾病的致病机理，并为进一步开发针对此类疾病的治疗方式提供服务。
主权项：1.一种LMNA基因敲除的小鼠模型的构建方法，其中所述方法包括：构建包含用于靶向所述第二外显子区域的gRNA的载体，并将载体通过体外转录，以得到gRNA注射液；将包含Cas9mRNA的载体通过体外转录，以得到Cas9mRNA注射液；将所述gRNA注射液和所述Cas9mRNA注射液混合，以得到基因编辑注射液；将所述基因编辑注射液注射到小鼠的受精卵内；将注射后的受精卵分裂得到的二细胞移植到假孕小鼠中，以得到F0代小鼠；基于F0代小鼠筛选LMNA基因敲除的纯合子代，以得到LMNA基因敲除的小鼠模型；其中用于靶向所述第二外显子区域的gRNA选自SEQIDNO:1所示的第一gRNA和SEQIDNO:2所示的第二gRNA；小鼠LMNA基因的第二外显子区域的靶序列如SEQIDNO:5所示；所述基因编辑注射液中Cas9mRNA、所述第一gRNA和所述第二gRNA的摩尔比为2～3:1～5：1～5；所述基因编辑注射液还包括荧光素，荧光素在所述基因编辑注射液中的浓度为0.5-2mgmL。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京实验动物研究中心有限公司 小鼠进行基因敲除的方法及构建的LMNA基因敲除小鼠模型
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