买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：南京元荟生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种用于打印人类精子体外分化成熟的三维结构的方法，涉及生物医学技术领域。本发明与之前的工程睾丸组织相比，改进了工程睾丸组织还不能可靠地支持人类精子的产生的问题，通过采用改性水凝胶与睾丸细胞混合制备生物墨水，以此打印3D人体睾丸；将人体睾丸细胞与人体细胞按比例融合培养，提升了3D打印的人体睾丸的与人体睾丸内环境的相似度，其具备的功能更加接近，为人类精子体外分化成熟提供良好的微环境，为个性化医学框架中提供疾病建模参考。

主权项：1.一种用于打印人类精子体外分化成熟的三维结构的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：设计并打印人类精子体外分化成熟的三维结构模型，并保存为STL格式文件；S2：取1-3mm人睾丸组织活检样品，用Ⅳ型胶原酶消化5~10分钟，在200~300xg下旋转5~10分钟后使用HBSS冲洗3~5次；将沉淀的小管重新悬浮在0.25~1%胰蛋白酶EDTA中，用5mL移液器移液3-5次，35~37℃孵育5~10分钟；S3：将孵育后的沉淀小管经100目过滤网过滤，1000~1200rmin离心15~30min后弃上清液，加入含1~10%FBS停止消化，用70µm滤器过滤小管，然后用40µm滤器过滤，然后在600~800xg下旋转15~20分钟，通过过夜培养将贴壁细胞在内皮细胞生长培养基:（Sertoli细胞培养基+Leydig细胞培养基）按照体积比为1:1制备的培养基混合物中扩增，次日将非贴壁细胞转移至单孔细胞粘附层粘连蛋白521包被的6孔板上，然后继续在培养基混合物中扩增，向StemPro-34SFM中补充培养剂；S4：取对数生长期的细胞，采用胰蛋白酶消化后将原代生殖细胞和体细胞组分按1:4的比例混合添加至补充了培养剂的StemPro-34SFM中，制成细胞数为3.5×107~3.5×108mL的生物细胞溶液；S5：制备生物水凝胶，并将其与制备的生物细胞溶液二者混合均匀作为3D打印生物凝胶墨水，将其装载到壳通道中，设置打印参数，逐层打印得到人类精子体外分化成熟的三维结构模型初体；S6：打印结束后，将整个打印结构整体置于真空干燥箱中进行热固化以稳定成型，再使用清洗溶液去除凝胶，得到人类精子体外分化成熟的三维结构模型成品；所述S3中添加的培养剂由1X胰岛素转铁蛋白硒溶液，30~35μgml丙酮酸钠，1~5μLmLDL-乳酸钠溶液，1XGlutaMAX，1XMEM维生素溶液，10-4Ml-抗坏血酸，10~20ngmLGDNF，100~120ngmLdTSSK，1.5~2UL促卵泡激素，0.5~0.8mgL巴戟天多糖，5~10µMICA，0.1~5ngmL亚油酸，0.1~5ngmLα-亚麻酸，0.5×10-3~1.8×10-3gmL葡萄糖，0.085~0.225gmL蔗糖和80~150mgL左卡尼汀组成。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京元荟生物科技有限公司 一种用于打印人类精子体外分化成熟的三维结构的方法