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申请/专利权人：广州市林业和园林科学研究院

摘要：本发明公开了一种杂交春石斛离体快繁的方法。该方法包括外植体预处理、外植体消毒、不定芽诱导、不定芽继代培养、不定芽扩繁和试管苗的移栽的步骤。本发明方法以母株粗壮健康的茎段为外植体，具有取材容易、材料量大、不受季节限制的优点。通过优化外植体消毒步骤、增殖培养基配方组成、以及接种方式，显著提高育苗效果。本发明方法具有外植体取材方便、育苗周期短、成苗率高、操作流程简单、成本相对低的优点。

主权项：1.一种杂交春石斛离体快繁的方法，其特征在于，包括以下步骤：1外植体预处理：将母株置于室内通风处预培养60-90天，期间用多菌灵溶液灌根培养,选择粗壮健康的茎段作为不定芽诱导的外植体；2外植体消毒：将茎段进行表面消毒后，按每个节位切分成2-3cm的小段，在超净工作台上依次浸入乙醇溶液和升汞溶液进行消毒，消毒后用无菌水清洗3-5次，用无菌刀片切除茎段两头与消毒液接触的组织，得到消毒后的外植体；3不定芽诱导：将消毒后的外植体接种于不定芽诱导培养基上进行培养，诱导出不定芽，不定芽诱导培养基的配方为：花宝1号2.0-3.0gL+胰蛋白胨2.5-3.0gL+椰汁70-80mLL+活性炭粉0.5-1.0gL+卡拉胶6.0-6.5gL+白砂糖30gL+6-BA3.0-5.0mgL+NAA0.1-0.2mgL，pH5.8-6.0；4不定芽继代培养：将不定芽从外植体上切下，转移到继代培养基中进行培养，获得完整植株；继代培养基的配方为：花宝1号2.0-3.0gL+胰蛋白胨2.5-3.0gL+椰汁70-80mLL+活性炭粉0.5-1.0gL+卡拉胶6.0-6.5gL+白砂糖30gL+6-BA2.0-3.0mgL+NAA0.1-0.2mgL，pH5.8-6.0；5不定芽扩繁：切除无菌植株的茎段的根系、叶片和顶芽，横向接种于增殖培养基中进行培养，获得生根试管苗；增殖培养基的配方为：花宝1号2.0-3.0gL+胰蛋白胨2.5-3.0gL+椰汁70-80mLL+活性炭粉0.5-1.0gL+卡拉胶6.0-6.5gL+白砂糖30gL+6-BA1.0-3.0mgL+NAA0.2mgL，pH5.8-6.0；6试管苗的移栽：将生根的试管苗从培养瓶中取出，洗去根系上残留的培养基，移栽于混合基质中进行种植。

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