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体外支架蛋白介导漆酶/木聚糖酶多酶复合体及其制备方法和应用 

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申请/专利权人:湖北大学

摘要:本发明涉及酶工程领域,尤其涉及一种体外支架蛋白介导漆酶木聚糖酶多酶复合体及其制备方法和应用。首先利用锚定蛋白DocS与支架蛋白mCipA上的内聚蛋白结构域将木聚糖酶和漆酶固定在支架蛋白mCipA上,形成漆酶木聚糖酶多酶复合体。将漆酶木聚糖酶多酶复合体用于纸浆的生物漂白,可以有效降低硫酸盐杨木纸浆卡伯值,提高纸浆白度。

主权项:1.一种体外支架蛋白介导漆酶木聚糖酶多酶复合体的制备方法,其特征在于,包括步骤:步骤1、支架蛋白mCipA的获取:从CipA基因中截取支架蛋白mCipA基因,将支架蛋白mCipA基因装载到载体质粒中得到重组质粒,再将重组质粒转入宿主菌中,得到重组菌株,对重组菌株诱导表达、蛋白纯化后得到支架蛋白mCipA,支架蛋白mCipA具有2~9个内聚蛋白结构域和一个纤维素结构域;步骤2、漆酶CotA-DocS的获取:将核苷酸序列如SEQIDNO.7所示的锚定蛋白基因DocS同核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的野生型漆酶CotA基因的C末端串联后装载到载体质粒中得到重组质粒,再将重组质粒转入宿主菌中,得到重组菌株,对重组菌株诱导表达、蛋白纯化后得到漆酶CotA-DocS;步骤3、木聚糖酶Xyn-DocS的获取:将核苷酸序列如SEQIDNO.7所示的锚定蛋白基因DocS同核苷酸序列如SEQIDNO.5所示的野生型木聚糖酶Xyn基因的C末端串联后装载到载体质粒中得到重组质粒,再将重组质粒转入宿主菌中,得到重组菌株,对重组菌株诱导表达、蛋白纯化后得到木聚糖酶Xyn-DocS;步骤4、漆酶木聚糖酶多酶复合体的体外组装将支架蛋白mCipA、漆酶CotA-DocS和木聚糖酶Xyn-DocS混合,位于漆酶CotA和木聚糖酶XynC末端的锚定蛋白DocS同支架蛋白mCipA上的内聚蛋白结构域之间通过疏水作用介导,在体外组装成漆酶木聚糖酶多酶复合体。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 湖北大学 体外支架蛋白介导漆酶/木聚糖酶多酶复合体及其制备方法和应用

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