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申请/专利权人：贵州省天然产物研究中心

摘要：本发明公开了一种两面针中粗生物碱HPLC指纹图谱的建立及抗白血病活性谱效分析方法。本发明建立了两面针中粗生物碱的HPLC指纹图谱，建立了10批不同来源的两面针中粗生物碱样品的HPLC指纹图谱，并指认了14个共有峰。通过聚类分析和主成分分析对两面针中粗生物碱样品进行综合分析，通过评价两面针中粗生物碱的抗白血病活性，通过灰色关联分析建立了两面中粗生物碱的抗白血病活性谱效关系，发现两面针粗生物碱中23个色谱峰与抗白血病活性呈正相关，并从中得到一组抗白血病活性强的复配物。本发明为合理评价两面针药材质量控制提供了进一步的科学依据，也为两面针活性生物碱成分的开发利用奠定了基础。

主权项：1.两面针中粗生物碱HPLC指纹图谱的建立及抗白血病活性谱效分析方法，其特征在于，包括：A、指纹图谱的建立，步骤包括：A1、样品选取：选取云南、广西、广东、福建四个省区不同地区的10批两面针样本的根部，经过鼓风干燥箱60℃烘干，粉碎，并过80目筛后得到的样品粉末；A2、两面针中粗生物碱的富集：采用加热回流提取的方式，以乙醇提取获得的总提取物，再经过大孔树脂富集得到粗生物碱；A3、供试品溶液的制备：精密称取各粗生物碱，90％乙腈溶解，制备成终浓度为60mgmL的两面针粗生物碱供试品溶液，0.45μm微孔滤膜过滤，将续滤液装入高液小瓶，进HPLC分析；A4、指纹图谱的建立：在色谱条件下，将10批两面针粗生物碱样品溶液注入HPLC，分别得到10批两面针粗生物碱色谱图；采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行相似性分析，将10批色谱图的“.cdf”格式导入该软件；样品1的色谱图设置为参考谱R，采用中位数法生成指纹图谱，时间窗宽度设置为0.1min，并由软件自动匹配进行相似度评价；A5、共有峰的标识：取标准品在相同色谱条件下分别注入HPLC体系进行定性分析，记录对照品保留时间；根据相同样品在相同的色谱分析条件下相对保留时间相同的原则确定峰，然后将含有标准溶液的混合标准溶液注入HPLC体系进行定性分析；B、粗生物碱抗白血病活性的测定：采用MTT法，以人红白血病细胞株HEL细胞株增殖活性为评价指标；C、通过偏最小二乘回归PLSR和灰色关联度分析GRA综合分析两面针中粗生物碱抗白血病活性谱效关系，得到了一组由五个共有峰化合物：氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、γ-崖椒碱、白鲜碱、橙黄胡椒酰胺组成的抗白血病活性复配物。

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