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申请/专利权人：福建医科大学附属第一医院

摘要：本发明公开了一种基于四面体DNA纳米材料的细胞信号转导活性检测方法，包含能够表征待测信号转导活性的转录因子的特异DNA结合序列以及荧光标记，当有标靶转录因子和TDNs结合时，将阻止荧光基团和淬灭基团的靠近，因此可以通过荧光基团的检测来分析转录因子活性。本发明简便高效，可以同步完成定性、定量、成像分析，且操作时间短。此外，本发明采用的四面体DNA纳米材料的合成方法简便，重现性好，并且可以根据待测靶标分子进行灵活设计，通用性强。

主权项：1.一种非诊断目的的基于四面体DNA纳米材料的细胞信号转导活性检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）根据靶标转录因子的特异DNA结合基序，设计四面体DNA纳米材料TDNs和置换链T，该四面体DNA纳米材料TDNs由五条单链DNA等摩尔自组装而成，这五条单链DNA依次为TDNs-A、TDNs-B、TDNs-C、TDNs-D和TDNs-cDNA，TDNs-A的5’端片段具有上述特异DNA结合基序的互补连续串联重复序列，TDNs-A的5’末端标记有荧光基团，TDNs-cDNA与上述互补连续串联重复序列完全互补配对，置换链T与上述互补连续串联重复序列互补配对，且在其5'端具有额外序列，以使置换链T与TDNs-A形成的双链结构的稳定性大于TDNs-cDNA与TDNs-A形成的双链结构的稳定性，且置换链T的5’末端标记有上述荧光基团的淬灭基团；（2）将上述四面体DNA纳米材料TDNs转染至待测细胞样本中，使细胞样本中的靶标转录因子与四面体DNA纳米材料TDNs充分结合；（3）收集转染后的待测细胞样本，进行固定和通透化，接着用牛血清白蛋白进行阻断，然后加入上述置换链T进行孵育，使得未结合靶标转录因子的四面体DNA纳米材料TDNs上的TDNs-cDNA被置换链T所替换，置换链T和TDNs-A的5’端片段互补结合为双链，使荧光基团的荧光被淬灭基团所淬灭；而结合了靶标转录因子的四面体DNA纳米材料TDNs上的TDNs-cDNA则不会被置换链T所替换，荧光基团发出的荧光可以发出；（4）对步骤（3）处理后的待测细胞样本所发荧光进行检测分析，从而得出靶标转录因子的活性情况，进而表征对应的信号转导活性；所述靶标转录因子为Smad23时，TDNs-A、TDNs-B、TDNs-C、TDNs-D和TDNs-cDNA的核苷酸序列依次如SEQIDNO.01至SEQIDNO.05所示，所述置换链T的核苷酸序列如SEQIDNO.06所示；所述靶标转录因子为HIF-a时，TDNs-A的核苷酸序列如SEQIDNO.07所示，TDNs-B、TDNs-C、TDNs-D和TDNs-cDNA的核苷酸序列依次如SEQIDNO.02至04及08所示，置换链T核苷酸序列如SEQIDNO.09所示。

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