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申请/专利权人：江南大学

摘要：本发明公开了一种基于T7RNA聚合酶的枯草芽孢杆菌双模块转录优化系统，属于生物技术领域。本发明构建的T7‑BOOST系统包括两部分：1T7RNA聚合酶驱动模块：该模块通过在基因组上整合了诱导型启动子控制的T7RNAP及诱导型启动子对应的阻遏蛋白表达框，得到稳定诱导表达T7RNAP的底盘菌株；2表达控制模块：该模块中包括带有杂合型T7启动子PT7‑inducer的质粒，其由T7RNAP专一性识别的启动子PT7和诱导性启动子对应的操纵子构成。本发明的构建的基于T7RNA聚合酶的枯草芽孢杆菌双模块转录优化系统，泄漏低，表达强度高，动态范围广，能有效表达蛋白和调控代谢产物合成，对枯草芽孢杆菌细胞工厂的构建及合成生物学研究有着重要的意义。

主权项：1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌含有枯草芽孢杆菌双模块转录优化系统，所述枯草芽孢杆菌双模块转录优化系统包括组成型表达的阻遏蛋白表达框、由诱导型启动子调控的T7RNA聚合酶表达框、以及由杂合型T7启动子调控的目的基因，采用pHT载体表达所述阻遏蛋白表达框、T7RNA聚合酶表达框和由杂合型T7启动子调控的目的基因；所述pHT载体通过以pHT01为模板连接Pveg启动子、Riboj核酶和RBS得到，所述RBS序列的核苷酸序列如SEQIDNO.15所示；当诱导型启动子为Phy-spank时，阻遏蛋白为lacI，杂合型T7启动子为PT7-lacO，构建的系统为第一转录优化系统，所述PT7-lacO的核苷酸序列SEQIDNO.4所示；当诱导型启动子为PxylA时，阻遏蛋白为xylR，杂合型T7启动子为PT7-xylO，构建的系统为第二转录优化系统，所述PT7-xylO的核苷酸序列SEQIDNO.5所示；其中，当目的基因为谷氨酸脱羧酶编码基因GADB时，枯草芽孢杆菌双模块转录优化系统为第一转录优化系统或第二转录优化系统；当目的基因为人源乳铁蛋白编码基因HLF时，枯草芽孢杆菌双模块转录优化系统为第二转录优化系统；当目的基因为人源αS1酪蛋白HA时，枯草芽孢杆菌双模块转录优化系统为第二转录优化系统；当目的基因为番茄红素表达基因簇crtEBI时，枯草芽孢杆菌双模块转录优化系统为第一转录优化系统；当目的基因为核黄素合成基因簇ribDEAHT时，枯草芽孢杆菌双模块转录优化系统为第二转录优化系统。

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百度查询： 江南大学 一种基于T7 RNA聚合酶的枯草芽孢杆菌双模块转录优化系统