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申请/专利权人：洛阳职业技术学院

摘要：本申请属于免疫学技术领域，具体涉及一种基于羊驼IgG抗体的制备方法。所述基于羊驼IgG抗体包括MGNb和RGNb两种。制备时，在这两种纳米抗体基因编辑序列的C端插入改造的亲和纯化组氨酸标签6xHE，以便于后续的重组表达。本申请利用大肠杆菌原核表达系统，发明人对羊驼来源的IgG进行了异源表达制备，并将所制备IgG抗体与现有商品化IgG抗体进行了对比评价。结果表明，能够较好利用该原核表达系统来异源表达获得抗体，且均能有效进行酶标，而且所制备的抗体与现有商品化IgG抗体活性相当。这些结果表明：利用基因工程技术手段，可以高效制备获得相关抗体产品，从而可为相关免疫检测产品制备奠定良好的技术基础。

主权项：1.一种基于羊驼IgG抗体的制备方法，其特征在于，所述基于羊驼IgG抗体包括：鼠抗IgG和兔抗IgG两种，制备时，在这两种纳米抗体基因编辑序列的C端插入改造的亲和纯化组氨酸标签6xHE，以便于后续的重组表达，重组表达制备的抗体分别记作：MGNb和RGNb；具体包括如下步骤：一序列优化为便于后续序列在大肠杆菌中表达，对原始IgG抗体序列进行密码子优化及增加组氨酸标签6×HE；优化后MGNb氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，具体如下：MQVQLVECGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDTWMNWVRQAPGKGLYWISAINPDGGNTAYADSVKGRFTISRDNAKNMVYLQMDNLRPEDTAMYYCAKGWVRLPDPDLVRGQGTQVTVSSASGGGSHEHEHEHEHEHE；优化后RGNb氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，具体如下：MQVQLVECGGGLVQAGDSLRLSCVASGRSLDGATMRWYRQAPGKEREFVAGIFWDEIGTEYADTAKGRFTISRDNAKNTIYLQMTNLRSEDTAMYYCNGLVFGGEYWGKGTLVTVSSASGGGSHEHEHEHEHEHE；二构建重组表达载体以质粒pET21b为载体，将步骤一中优化后氨基酸序列对应核苷酸序列重组到pET21b中，构建重组质粒表达载体：pET21b-MGNb和pET21b-RGNb；三转化和诱导表达将步骤二中的重组质粒表达载体pET21b-MGNb和pET21b-RGNb分别转化感受态细胞，并筛选、鉴定转化正确菌株；将转化正确菌株培养并诱导蛋白表达；四蛋白纯化在步骤三中诱导表达结束后，将菌液离心、收集菌体沉淀；破碎菌体沉淀后，离心、收集上清液，并过Ni-NTA柱，洗杂、洗脱后获得纯化的目的蛋白。

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权利要求：

百度查询： 洛阳职业技术学院 一种基于羊驼IgG抗体的制备方法