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申请/专利权人：厦门大学

摘要：本申请涉及核酸分子的多重检测。特别地，本申请提供了一种检测靶核酸序列的方法，所述方法能够在单一反应体系中同时定性和定量检测多种靶核酸序列，并且具有高通量、低成本、探针选择灵活、高灵敏和高特异的特点。

主权项：1.用于非疾病诊断目的的检测样品中的靶核酸的方法，其包括以下步骤：a提供以下反应组分：i针对每一种需要定量测定的靶核酸序列，提供一种上游引物和一种检测探针；其中，所述上游引物包含与所述靶核酸序列互补的序列；所述检测探针包含与所述靶核酸序列互补的序列，并且标记有定量报告基团和淬灭基团；并且，当与第一靶核酸序列杂交时，所述上游引物位于所述检测探针的上游；并且，所有检测探针所标记的定量报告基团彼此不同；并且其中，i中所述的检测探针中的定量报告基团为荧光基团，所述淬灭基团为能够吸收淬灭所述荧光的分子或基团；ii针对每一种需要定性测定的靶核酸序列，提供一种上游引物和一种媒介子探针；其中，所述上游引物包含与所述靶核苷酸序列互补的序列；所述媒介子探针从5'至3'方向包含媒介子序列和靶特异性序列，所述媒介子序列包含不与所述靶核酸序列互补的序列，并且，所述靶特异性序列包含与所述靶核酸序列互补的序列；并且，当与所述靶核酸序列杂交时，所述上游引物位于所述靶特异性序列的上游；并且，所有媒介子探针所包含的媒介子序列彼此不同；iii针对ii中所述的媒介子探针提供一种或多种通用探针，其中，每一种通用探针各自独立地从3'至5'方向包含：与一种或多种媒介子序列或其部分互补的一种或多种捕获序列，以及模板序列；并且，所述一种或多种通用探针所包含的捕获序列能够分别与ii中的每种媒介子探针的媒介子序列或其部分互补；并且，每一种通用探针各自独立地标记有定性报告基团和淬灭基团；并且其中，iii中所述的通用探针中的定性报告基团为荧光基团；并且，所述淬灭基团为能够吸收淬灭所述荧光的分子或基团；b使含有待测靶核酸序列的样品在单个反应容器中与a中所述的组分接触，并实施PCR反应条件；c在PCR循环中的特定温度下测量来自ai中所述的定量报告基团的信号，所述特定温度高于退火温度和延伸温度；基于所测定的所述定量报告基团的信号，确定对应靶核酸序列的存在或其量；其中，所述特定温度为变性温度，所述变性温度为94–98°C；d在PCR结束后，对扩增产物进行熔解曲线分析，所述熔解曲线分析包括测量来自aiii中所述的定性报告基团的信号，基于所测定的所述定性报告基团的信号，确定对应靶核酸序列的存在；并且，其中：在步骤a的i中，除了所述上游引物和检测探针之外，针对需要定量检测的每一种靶核酸序列，还提供一种下游引物；其中，所述下游引物包含与所述靶核酸序列互补的序列；并且，当与所述靶核酸序列杂交时，所述下游引物位于所述检测探针的下游；在步骤a的ii中，除了所述上游引物和媒介子探针之外，针对需要定性检测的每一种靶核酸序列，还提供一种下游引物；其中，所述下游引物包含与所述靶核酸序列互补的序列；并且，当与所述靶核酸序列杂交时，所述下游引物位于所述靶特异性序列的下游。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 厦门大学 用于进行核酸多重检测的方法