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申请/专利权人：华治医药(云南)有限公司

摘要：本发明提供一种菲牛蛭药材活性检测方法，包括取菲牛蛭药材0.5g，精密称定，精密加入0.9％氯化钠溶液15ml，充分搅拌，浸提30分钟，并时时振摇，过滤，精密量取续滤液100μl、3次，分别置于3个试管中，并分别将试管标记为A、B、C，分别加入含0.5％纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液200μl，摇匀，3份待测试管置于水浴中37℃±0.5℃温浸5分钟，滴加每1ml中含有40单位的凝血酶溶液。本发明通过在实验员能力范围之内通过增加平行样、凝血酶溶液剂量倍数来快速精确的完成对菲牛蛭药材抗凝活性的检测，设计了一套较为完整的操作判断流程。

主权项：1.一种菲牛蛭药材活性检测方法，其特征在于,包括：取菲牛蛭药材0.5g，精密称定，精密加入0.9％氯化钠溶液15ml，充分搅拌，浸提30分钟，并时时振摇，过滤，精密量取续滤液100μl、3次，分别置于3个试管中，并分别将试管标记为A、B、C，分别加入含0.5％纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液200μl，摇匀，3份待测试管置于水浴中37℃±0.5℃温浸5分钟，滴加每1ml中含有40单位的凝血酶溶液；A试管样品首次滴加12μl凝血酶溶液，在计时的前20秒之内完成；B试管样品首次滴加8μl凝血酶溶液，在1分钟的21-40秒完成；C试管样品首次滴加4μl凝血酶溶液，在1分钟的后20秒完成，边滴加边轻轻摇匀；若A试管样品、B试管样品、C试管样品都不凝固，则分别对应144U、96U、48U三个梯度的活性结果；情形1：若A试管样品、B试管样品、C试管样品皆凝固，则说明抗凝活性低于48U；此时刻直接判定菲牛蛭样品不合格；情形2：若A试管样品、B试管样品均凝固，C试管样品不凝固，说明抗凝活性高于48U、低于96U；从第2分钟起对C试管样品每分钟滴加凝血酶溶液1μl至凝固，计算C试管样品的活性结果，并判定其所代表的菲牛蛭药材活性是否合格；情形3：若样品A试管样品凝固，B试管样品、C试管样品均不凝固，说明抗凝活性高于96U、低于144U；从第2分钟起对B试管样品每分钟滴加凝血酶溶液1μl至凝固，计算B试管样品的活性结果，并判定其所代表的菲牛蛭药材活性是否合格；情形4：若A试管样品、B试管样品、C试管样品均不凝固，说明抗凝活性高于144U，并继续采取以下操作：第2分钟，若样品A试管样品、B试管样品、C试管样品均滴加8μl凝血酶溶液，此时A试管样品、B试管样品、C试管样品对应的活性结果分别为240U、192U、144U；若A试管样品、B试管样品均凝固，C试管样品不凝固，说明样品活性大于144U、小于192U，直接在第3分钟开始对C试管样品每分钟滴加凝血酶溶液1μl至凝固，计算C试管样品的活性结果；若A试管样品凝固，B试管样品、C试管样品均不凝固，说明样品活性大于192U、小于240U，直接在第3分钟开始对B试管样品每分钟滴加凝血酶溶液1μl至凝固，计算B试管样品的活性结果；若A试管样品、B试管样品、C试管样品均不凝固，说明样品活性大于240U，可再次在第3分钟对A试管样品、B试管样品、C试管样品分别滴加8μl凝血酶溶液，使A试管样品、B试管样品、C试管样品对应的活性结果分别为336U、288U、240U；若A试管样品、B试管样品均凝固，C试管样品不凝固，说明样品活性大于240U、小于288U，直接在第4分钟开始对C试管样品每分钟滴加凝血酶溶液1μl至凝固，计算C试管样品的活性结果；若A试管样品凝固，B试管样品、C试管样品不凝固，说明样品活性大于288U、小于336U，直接在第4分钟开始对B试管样品每分钟滴加凝血酶溶液1μl至凝固，计算B试管样品的活性结果；若A试管样品、B试管样品、C试管样品均不凝固，说明样品活性大于336U，此数值基本超出了绝大部分菲牛蛭药材的活性范围，如确实发生，可再次在第4分钟对A试管样品、B试管样品、C试管样品分别滴加8μl凝血酶溶液，重复上一步操作即可。

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