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申请/专利权人:安顺市疾病预防控制中心
摘要:本发明提供了一种从鬼伞菌属中层析分离提取高纯鬼伞菌素及基于UPLC‑MSMS的鬼伞菌素定量检测方法,本发明基于层析分离技术构建了从鬼伞菌属中高纯分离提取鬼伞菌素的工艺,相较于化学合成,其操作简单、通用性强、成本低;并且提纯分离出的鬼伞菌素纯度高,经检测所制备的鬼伞菌素的纯度可达到HPLC级;并本发明还构建了基于UPLC‑MSMS的鬼伞菌素定量检测方法,检测选择性强,分析时间短,定量准确,通过对定量方法的基质效应、线性关系、检出限、准确度和精密度进行方法确认考察,均能满足鬼伞菌素定量分析要求;并且以UPLC‑MSMS定量检测方法中的MRM的基础上设定IDA判定条件和EPI条件建立鬼伞菌素数据库,通过数据库的建立可很好地满足鬼伞菌属类食源性中毒快速筛查的需求。
主权项:1.一种从鬼伞菌属中层析分离提取高纯鬼伞菌素的方法,其特征在于,其包括如下步骤:S1:分离提取液制备1.1取子实体成熟的鬼伞菌,粉碎后,进行均质,获得鬼伞菌样;1.2取甲醇水-乙腈混合提取液加入至步骤1中的均质后的鬼伞菌样中,混合均匀;超声提取后,离心,取上清液;1.3离心分离后的残渣再次加入甲醇水-乙腈混合提取液混合,经过超声提取后,离心,取上清液;1.4将步骤1.2和步骤1.3的上清液进行合并,并于合并后的上清液中加入色谱纯级别的正己烷溶液;1.5将步骤1.4的料液在零下进行冷冻后,在零上进行离心,离心后,去除上层正己烷溶液;1.6将步骤1.5离心去除上层正己烷溶液料液进行过滤后,取滤液,即为待分离提纯的分离提取液;S2:利用分离提纯层析柱对步骤S1的分离提取液中的鬼伞菌素进行分离提纯获得鬼伞菌素提纯液;所述分离提纯层析柱内的填料为双层填料,上层为Toyopearl尺寸排阻凝胶树脂填料,下层为C18混合填料,所述Toyopearl尺寸排阻凝胶树脂填料和C18混合填料之间具有滤孔筛板;所述C18混合填料由C18填料、氨丙基键合球形硅胶、中性氧化铝混合组成;本步骤中分离提纯参数见下:流动相:30%~50%vv甲醇水;检测波长:254nm或256nm;收集模式:时间窗模式,收集时间0.5~1.5min。
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权利要求:
百度查询: 安顺市疾病预防控制中心 一种从鬼伞菌属中层析分离提取高纯鬼伞菌素及基于UPLC-MS/MS的鬼伞菌素定量检测方法
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