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申请/专利权人：吉林省肿瘤医院
摘要：本发明提供了一种肺腺癌患者恶性胸腔积液2.5D类器官模型的构建工艺，首先收集晚期肺腺癌患者的恶性胸腔积液（MPE），通过利用患者来源MPE中的沉淀细胞构建支架细胞层，并利用MPE上清液和商品化DMEM‑F12培养液混合制备2.5D类器官培养基，通过在支架细胞层上接种MPE中的肿瘤细胞实现在2D培养条件下培养类器官，这种类器官被称为2.5D类器官。本发明涉及类器官技术领域，本专利建立了一种生产肺腺癌2.5D类器官的创新培养工艺，全程避免使用传统3D类器官培养所需的昂贵的商品化基质胶和细胞因子，实现了显著降低了培养成本和简化流程的目的。这些2.5D类器官具有3D结构和肿瘤特有的上皮和间质结构，是一种良好的3D类器官的替代模型。
主权项：1.一种肺腺癌患者恶性胸腔积液2.5D类器官模型的构建工艺，其特征在于，包括以下步骤：S1、样本获取：恶性胸腔积液100-200ml，其中的肿瘤细胞计数数量级需达到105~7个；S2、离心：对步骤S1中的恶性胸腔积液进行离心，收集肿瘤细胞和上清；S3、消化：对步骤S2中离心后的肿瘤细胞进行消化得到单细胞悬液；S4、过滤：对步骤S3中消化后的单细胞悬液进行过滤，在显微镜下进行肿瘤细胞计数；S5、基础培养基：将步骤S4中的恶性胸腔积液细胞沉淀重悬，按103个cm2细胞接种于基础培养皿上，使用含10%胎牛血清的DMEM-F12培养基在5%CO2的37℃恒温培养箱中培养1-3天；S6、支架细胞层：步骤S5中的培养皿底部形成一层致密的贴壁细胞即支架细胞层，去除悬浮细胞后加入等量DMEM-F12培养液继续培养备用；S7、自制培养液：将步骤S2中的恶性胸腔积液上清和DMEM-F12培养液1:1混合后得到自制培养液；S8、类器官收集：将步骤S4中的104个cm2肿瘤细胞接种于步骤S6中的支架细胞层上，将步骤S7重悬细胞后加入基础培养基内，随后置于培养箱中继续培养等待细胞聚集和分化，每3天更换一次培养液；1-10天内形成大量类器官，将类器官洗涤去除，即可露出底层的支架细胞层，最终培养出肉眼可见的白色类器官颗粒，即2.5D类器官。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 吉林省肿瘤医院 一种肺腺癌患者恶性胸腔积液2.5D类器官模型的构建工艺
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