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申请/专利权人：沈阳农业大学

摘要：本发明一种用于马个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其18‑plex快速分型检测方法，属于分子生物学领域。本发明应用多重PCR技术，通过筛选马高多态性四碱基重复微卫星位点，并结合引物设计,研发了一套基于四碱基重复微卫星标记的马个体识别和亲子鉴定快速检测方法。包括筛选出马的16个高多态性四碱基重复微卫星位点并结合2个性别鉴定位点，将所述16对微卫星引物和2对性别鉴定引物合成18对荧光引物，通过一次PCR扩增得到16个目标微卫星序列和2个性别鉴定结果。本发明简便、高效，同时可鉴定检测样品的性别。扩增结果稳定且具有更高的灵敏度，适用于马的个体识别、亲子鉴定，以及基于微卫星标记的马群体遗传学研究。

主权项：1.一个马个体识别和亲子鉴定的微卫星标记的引物组别，其特征在于：由16对微卫星引物序列及2对性别鉴定位点引物序列组成，18对引物序列及携带的荧光标记为：微卫星位点ZECA01，引物序列F:CCCATGTATTGAAGTGATAATGCT，R:GTTTCTTGTTTCTTTAGGGACCTTGTTGCTTTGG；产物范围276-325bp，引物终浓度117nML，携带标记为HEX；微卫星位点ZECA03，引物序列F:TGCTATTTCCAGAGCAAGGG，R:GTTTCTTTGGATTGGAAGTGAAGGCAT；产物范围220-275bp，引物终浓度103nML，携带标记为HEX。微卫星位点ZECA05，引物序列F:GTGAGTGCACAAGAAGCATTT，R:GTTTCTTGTTTCTTGTTTCTTTGTAAGTTCCCTGAGCCTGG；产物范围226-259bp，引物终浓度117nML，携带标记为ROX；微卫星位点ZECA06，引物序列F:GGTATATTGGAGGCATCAGCA，R:GTTTCTTCAATCACCTTCTTATCTGTCAATCA；产物范围175-230bp，引物终浓度158nML，携带标记为FAM；微卫星位点ZECA07，引物序列F:AATTGGGCTAACTGGGCTTT，R:GTTTCTTGCCCAATATAGCTAAATAGAAGGC；产物范围140-200bp，引物终浓度84nML，携带标记为HEX；微卫星位点ZECA08，引物序列F:GCCTTTGGAGGAATTAAAGACA，R:GTTTCTTACCGACGGATAATGGAACAG；产物范围175-225bp，引物终浓度121nML，携带标记为ROX；微卫星位点ZECA09，引物序列F:GCCAAAGAATGAGGAGGTTG，R:GTTTCTTGAACTTCATAGACCTGGCTGCT；产物范围105-174bp，引物终浓度87nML，携带标记为FAM。微卫星位点ZECA11，引物序列F:CATCTGGGTGCATTTCCTCT，R:GTTTCTTGCATGATACCCAACCCTGTC；产物范围235-305bp，引物终浓度89nML，携带标记为FAM；微卫星位点ZECA12，引物序列F:CCTCAATCATGTAAGGGAGACC，R:GTTTCTTTCAAACCAAACTGTCAACCAG；产物范围306-360bp，引物终浓度115nML，携带标记为FAM；微卫星位点ZECA13，引物序列F:GCCATTTCAAACCACCAAAT，R:GTTTCTTTGAGGCCAGTGTGCTTGTAG；产物范围326-390bp，引物终浓度125nML，携带标记为HEX；微卫星位点ZECA15，引物序列F:GGGTGCCCACTGCAGATA，R:GTTTCTTGTTTCTTGGGATGCGTGTATATTCTTTCA；产物范围101-165bp，引物终浓度149nML，携带标记为ROX；微卫星位点ZECA19，引物序列F:TTACCCAATGCCCTGTGAAT，R:GTTTCTTCCTGAAGAAAGTGTCCTGGC；产物范围375-425bp，引物终浓度112nML，携带标记为FAM；微卫星位点ZECA22，引物序列F:GAGGCTCTTGATGCTGCACT，R:GTTTCTTGTTTCTTTGCTGGTTACACACATTGTTCA；产物范围435-500bp，引物终浓度177nML，携带标记为FAM。微卫星位点ZECA24，引物序列F:GGCAGAGTGTACAACAGTCAGG，R:GTTTCTTGTTTCTTGTTTCTTGAAAGAGCTGTGCAGTCTGG；产物范围400-450bp，引物终浓度100nML，携带标记为HEX；微卫星位点ZECA27，引物序列F:GAAGAATGACACCAGAAGATTCCT，R:GTTTCTTGACCTCATGCAAATCTCTGCT；产物范围410-500bp，引物终浓度163nML，携带标记为ROX；微卫星位点ZECA31，引物序列F:CAAACAGGATAGATAAGGATCGC，R:GTTTCTTGTTTCTTGTTTCTTGGTGTCACAGAGGTTTCCGT；产物范围260-320bp，引物终浓度90nML，携带标记为ROX；性别鉴定位点Amel，引物序列F:TCCTCCCGCTTGGTCTTGTC，R:GTTTCTTTGTCCCAGCAGAATCCCTCA；产物范围355-375bp，引物浓度67nML，携带标记为ROX；性别鉴定位点SRY，引物序列F:GATGCCAGTGGAAAATGCTTAC，R:GTTTCTTAAGGAAATCAAGGAAAATCACC；产物范围450-500bp，引物终浓度200nML，携带标记为HEX。

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