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申请/专利权人:吴迪;托马什·沃特;马茨·尼尔松·贝尼茨
摘要:本发明涉及生物技术领域和用于创建cDNA库的方法。更具体地,本发明涉及从RNA原位形成互补DNAcDNA测序库的方法,其包括以下步骤:a固定细胞,固定在固体表面上;b使用包含PCR柄部1的RT引物和部分生物素化的dNTP在细胞内进行原位逆转录RT;c使用释放混合物从细胞中释放单链cDNA,其中该释放混合物包含RNAse,使得该单链cDNA从完整细胞中释放;d将包含释放的cDNA的上清液收集到单个较大体积或分离体积中;以及e引入包含将与延长的cDNA的3’结合的PCR柄部2的衔接分子。
主权项:1.一种由RNA原位形成互补DNA测序库的方法,包括以下步骤:a)固定细胞,固定在固体表面上;b)使用包含PCR柄部1的逆转录引物和部分生物素化的dNTP,在细胞内进行原位逆转录;c)使用释放混合物从所述细胞中释放单链cDNA,其中所述释放混合物包含RNase,使得所述单链cDNA从完整细胞中释放;d)将包含释放的cDNA的上清液收集到单个较大体积或分离体积中;以及e)引入包含将结合延长的cDNA的3’的PCR柄部2的衔接分子。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 吴迪 托马什·沃特 马茨·尼尔松·贝尼茨 用于创建cDNA测序库的方法
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