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申请/专利权人:中国科学院深圳先进技术研究院
摘要:本发明公开一种重组家蚕核型多角体病毒的制备方法、重组腺相关病毒制备系统和制备方法。本发明重组腺相关病毒制备系统包括:a低血清悬浮培养BMN细胞和或低血清悬浮培养BMN细胞的贴壁培养细胞,b重组家蚕核型多角体病毒,所述重组家蚕核型多角体病毒感染宿主细胞或宿主至少可产生重组腺相关病毒包装所需的功能蛋白。本发明提供的重组腺相关病毒制备方法,通过利用重组家蚕核型多角体病毒感染悬浮培养或者悬浮转贴壁培养的BMN细胞。本发明基于家蚕杆状病毒表达系统制备的重组腺相关病毒滴度高、空壳率低、感染活性好。
主权项:1.一种单一重组家蚕核型多角体病毒的制备方法,其特征在于,所述制备方法选自方法1-3中的一种:方法1:将单一BmNPV-rAAV重组杆粒转染低血清悬浮培养BMN细胞的贴壁培养细胞,拯救出子一代出芽型重组家蚕核型多角体病毒,子一代出芽型重组家蚕核型多角体病毒记为P1代rBmBEV-rAAV,即为单一重组家蚕核型多角体病毒;方法2:将单一BmNPV-rAAV重组杆粒转染低血清悬浮培养BMN细胞的贴壁培养细胞,拯救出P1代rBmBEV-rAAV;将P1代rBmBEV-rAAV感染低血清悬浮培养BMN细胞的贴壁培养细胞,得到子代rBmBEV-rAAV,即为单一重组家蚕核型多角体病毒;方法3:将单一BmNPV-rAAV重组杆粒转染低血清悬浮培养BMN细胞的贴壁培养细胞,拯救出P1代rBmBEV-rAAV;将P1代rBmBEV-rAAV感染低血清悬浮培养BMN细胞,得到子代rBmBEV-rAAV,即为单一重组家蚕核型多角体病毒;所述单一BmNPV-rAAV重组杆粒包含重组腺相关病毒核心表达元件ITR-GOI、Rep基因表达框和Cap基因表达框。
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