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申请/专利权人：中科(广州)生命科学研究有限公司

摘要：本发明提供一种鉴定生物学亲缘关系的分析方法，其特点在于将如SEQIDNO：9所示的抗cfDNA核小体复合体表面H2B抗原的纳米抗体偶联的磁珠悬液进入尺寸排阻色谱柱，然后将尺寸排阻色谱柱放置在具有强磁场的磁力架上，通过磁场强弱改变磁珠复合物在尺寸排阻色谱柱中运动速率，得到高浓度、高纯度的cfDNA，然后高通量测序分析并计算CFSI和CLR亲缘关系指数，该方法在亲缘关系鉴定中的具有较高的应用效能。

主权项：1.一种鉴定生物学亲缘关系的分析方法，其特征在于包括如下步骤：S1向待鉴定亲缘关系的人血浆样本内加入裂解结合液、蛋白酶K和如SEQIDNO：9所示NH-7纳米抗体偶联的磁珠悬液，颠倒混匀后，室温裂解结束后，将含磁珠的混合裂解液转移至尺寸排阻色谱柱，然后将尺寸排阻色谱柱放置在具有强磁场的磁力架上，通过磁场强弱改变cfDNA核小体-纳米抗体-磁珠复合物在尺寸排阻色谱柱中运动速率，从而与其他杂质形成速率差，最后经PBS洗脱液重复循环洗脱后收集得到含有cfDNA核小体-纳米抗体-磁珠复合物的混合液；S2向含有cfDNA核小体-纳米抗体-磁珠复合物的离心管内加入洗涤液，涡旋混匀，离心管放置在磁力架上，待磁珠完全聚集后，吸出上清液；重复步骤S2三次，室温放置2-10min；S3向步骤S2的离心管内加入洗脱液，涡旋混匀，37-60℃恒温孵育5-15min；S4将步骤S3的离心管置于磁力架上，待磁珠完全聚合后，吸出上清液；S5向步骤S4上清液中再次加入裂解结合液、蛋白酶K和羧基修饰的超顺磁性纳米微球悬液，颠倒混匀后，室温裂解结束后将反应管置于磁力架，静置，弃去残余液体，重复步骤S2-S4，进一步分离提纯得到cfDNA提取液。S6对S5步骤提取的cfDNA进行高通量测序，测序选择与CFSI和二级亲缘关系CLR相关的检测基因，即选自D3S1358、D18S51、D8S1179、D5S818、D7S820和CSF1PO的STR标记基因以及选自rs1805007、rs1042522和rs1799782的SNP标记基因，对测序的结果利用Familias软件对不同亲缘关系类型进行分析，计算CFSI和二级亲缘关系CLR的亲缘关系指数。

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