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申请/专利权人：奥辰生物(云南)有限公司

摘要：本发明公开了一种人脐带高活性间充质干细胞的应用。用含5％CloneR的TeSR‑E8以及LN521‑Coated培养瓶，从人脐带组织中分离出HA‑MSC，建立HA‑MSC分离、扩增、冻存技术体系。本发明制备的HA‑MSC与常规培养的MSC相比，增殖活性较高，体积较小，核质比较高，高表达胚胎干细胞相关标志性抗原SOX2、Nanog、OCT4，具有向三胚层来源的神经、心肌和肝肠祖细胞分化的潜能，并且具备良好的抗衰老活性。

主权项：1.一种人脐带高活性间充质干细胞MSC在制备抗衰老制剂中的用途，其特征在于，所述高活性MSC的制备方法包括以下步骤：S1、试剂制备S11、高活性MSC完全培养基的配制：在TeSR-E8BasalMedium中加入TeSR-E8Supplement，颠倒混匀后再加入CloneR，用6.6％NaHCO3调节pH值范围在7.2-7.4，4℃储存备用；S12、高活性MSC培养瓶的制作：2-8℃缓慢解冻层粘连蛋白LN521原液，用1×DPBSCa2+Mg2+稀释层粘连蛋白LN521原液，即为包被液，培养瓶中加入包被液，使之均匀覆盖整个瓶底，置于2-8℃孵育备用；S2、原代培养S21、将采集的人脐带清洗去掉残留的血液；S22、将脐带分解为小组织块，转移至高活性MSC培养瓶中；S23、高活性MSC培养瓶加入高活性MSC完全培养基，缓慢晃动瓶身，置于37℃、5％CO2的培养箱中进行原代培养；S24、第3天补充高活性MSC完全培养基，之后每隔3-4天换液；S25、传代时，收集脱落组织块，按照以上方式可以进行二次贴壁培养；S3、传代培养S31、从培养箱取出细胞，丢弃陈旧培养基，加入生理盐水轻轻冲洗1次；S32、原代高活性MSC加入RecombinantTrypsin-EDTASolution，置于37℃、5％CO2的培养箱中作用3-5mins；S33、细胞完全脱落后，加入等量高活性MSC完全培养基终止消化，收集细胞加入生理盐水，1500rpm离心4mins；S34、离心后弃上清，加入高活性MSC完全培养基，轻轻吹打混匀细胞，台盼蓝染色计数活细胞数量；S35、按照5000个细胞cm2的接种密度将细胞接种至新的高活性MSC培养瓶；S36、置于37℃、5％CO2的培养箱中进行扩增培养。

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