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申请/专利权人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

摘要：本发明公开了用于检测猪圆环病毒2型的红色乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用。所述的试纸条包括PVC底板，以及在PVC底板上从左到右依次组装的结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述的结合垫上涂覆有红色乳胶微球偶联的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体7C7，所述的硝酸纤维素膜上设有包被抗猪圆环病毒2型单克隆抗体9H4的检测线以及包被山羊抗鼠IgG的质控线。本发明中标记抗体和捕获抗体是挑选的最为广谱性的单抗，故对三种基因型的PCV2都具有较好的检测敏感性，与其他的病毒均无交叉反应。因此，本发明成功筛选出PCV2的广谱性单抗且成功建立了检测PCV2抗原的红色乳胶微球免疫层析试纸条，为后续的PCV2流行病学调查和净化提供了新的技术手段。

主权项：1.用于检测猪圆环病毒2a、2b以及2d亚型的红色乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于，所述的试纸条包括PVC底板，以及在PVC底板上从左到右依次组装的结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述的结合垫上涂覆有红色乳胶微球偶联的抗猪圆环病毒2型病毒单克隆抗体7C7，所述的硝酸纤维素膜设有包被抗猪圆环病毒2型病毒单克隆抗体9H4的检测线以及包被山羊抗鼠IgG的质控线；其中，所述的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体7C7，命名为mAb7C7，是由保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为：CGMCCNo.23871，保藏日期为2021年11月18日的杂交瘤细胞株分泌产生；其中，所述的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体9H4，命名为mAb9H4，是由保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为：CGMCCNo.23870，保藏日期为2021年11月18日的杂交瘤细胞株分泌产生；其中，所述的红色乳胶微球偶联的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体7C7通过以下方法制备得到：取1mg红色乳胶微球溶液，80HZ超声5min，用超纯水稀释200倍，然后10000rpm离心10min，洗去上清，沉淀用pH＝5.6的1000μl0.1M的柠檬酸缓冲液溶解，80HZ超声5min；获得的溶液在磁力搅拌下缓慢加入100μl浓度为1mgml纯化后的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体7C7，室温缓慢搅拌2h后缓慢加入50gLBSA使其终浓度为10gL，继续搅拌1小时后10000rpm离心1h；沉淀用0.1MPBS溶解，80HZ超声5min，反复洗涤3次，最终沉淀用0.1MPBS溶解至原体积的120，得到红色乳胶微球偶联的抗猪圆环病毒2型病毒单克隆抗体7C7溶液。

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权利要求：

百度查询： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) 用于检测猪圆环病毒2型的红色乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用