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申请/专利权人：贵州茅台酒股份有限公司

摘要：本发明公开了一种基于绝对定量鉴定酿酒酵母中LM核酸片段的方法，属于生物工程技术领域。本发明提供了一种鉴定酿酒酵母LdsRNA和酿酒酵母MdsRNA的SYBRGreenI荧光定量方法，此方法为先将一定浓度梯度的重组质粒进行SYBRGreenI荧光定量，建立质粒浓度与CT值的标准曲线，再提取样本微生物RNA逆转录为cDNA进行SYBRGreenI荧光定量，以标准曲线公式为依据，直接计算得到酿酒酵母LdsRNA和酿酒酵母MdsRNA片段的浓度，以达到快速绝对定量的目的。本发明旨在快速、准确检测发酵微生物中酿酒酵母LdsRNA和酿酒酵母MdsRNA的含量，进而为揭示其在白酒发酵过程中的影响、作用和演替规律，同时为提高白酒的品质奠定基础，具有较高的实际应用价值。

主权项：1.一种检测酿酒酵母中LM核酸片段的方法在监测酿造过程中酿酒酵母LdsRNA和酿酒酵母MdsRNA动态变化中的应用，其特征在于，所述方法为提取微生物RNA，反转录得到cDNA，使用检测试剂盒经过qPCR检测得到的数值代入标准曲线获得LdsRNA或MdsRNA的拷贝数；所述检测试剂盒包含检测LdsRNA的引物对A和或MdsRNA的引物对B；引物对A的上游引物的序列如SEQIDNO.1所示，下游引物的序列如SEQIDNO.2所示；引物对B的上游引物的序列如SEQIDNO.3所示，下游引物的序列如SEQIDNO.4所示；所述检测试剂盒还含有标准样品，所述标准样品为过表达LdsRNA和或MdsRNA基因片段的阳性质粒；LdsRNA的基因片段的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，MdsRNA基因片段的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；所述检测试剂盒的反应体系如下：Mixture10μL，上游引物、下游引物各0.4μL，DNA2μL，ddH2O补足至20μL；所述检测试剂盒的扩增程序为：94℃2min，94℃30s，55℃45s，72℃30s，35个循环，72℃30s；当测定LdsRNA时，标准曲线公式为y=-3.8305x+41.259，当测定MdsRNA时，标准曲线公式为y=-3.3286x+38.982；所述检测的定量限为1×101copiesμL。

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