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恭喜南京市食品药品监督检验院周海波获国家专利权

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龙图腾网恭喜南京市食品药品监督检验院申请的专利一种基于原核Argonaute蛋白检测副溶血性弧菌的方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118773359B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-29发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411266528.3,技术领域涉及:C12Q1/689;该发明授权一种基于原核Argonaute蛋白检测副溶血性弧菌的方法及应用是由周海波;刘新梅;杨军;别小妹;唐思颉;孙小杰设计研发完成,并于2024-09-11向国家知识产权局提交的专利申请。

一种基于原核Argonaute蛋白检测副溶血性弧菌的方法及应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于原核Argonaute蛋白检测副溶血性弧菌的方法及应用,属于食品安全检测技术领域。本发明筛选得到了切割效率高的gDNAs和荧光探针,同时结合LAMP高效扩增和PfAgo靶向切割的优势,建立了针对副溶血性弧菌的LAMP‑PfAgo快速检测方法,有效弥补了单纯LAMP技术假阳性高的缺点,进一步提高了检测的特异性和灵敏度;此方法操作简便、设备要求低,可在45min内完成检测。本发明对纯培养物的检出限能够达到5.47CFUmL,对人工污染样品的检出限为7.84×101CFUmL,具有良好的实际应用效果。

本发明授权一种基于原核Argonaute蛋白检测副溶血性弧菌的方法及应用在权利要求书中公布了:1.一种检测副溶血性弧菌的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中包括LAMP扩增组合物和PfAgo切割组合物,所述LAMP扩增组合物包括一对外引物F3和B3以及一对内引物FIP和BIP;所述外引物F3的核酸序列如SEQIDNO:1所示,所述外引物B3的核酸序列如SEQIDNO:2所示,所述内引物FIP的核酸序列如SEQIDNO:3所示,所述内引物BIP的核酸序列如SEQIDNO:4所示,所述PfAgo切割组合物包括一对向导DNAgF5和gT5以及探针Pb2;所述gDNAgF5的核酸序列如SEQIDNO:14所示,所述gDNAgT5的核酸序列如SEQIDNO:15所示,所述探针Pb2的核酸序列如SEQIDNO:22所示;所述试剂盒还包括LAMP扩增试剂和PfAgo检测试剂;所述LAMP扩增试剂包括10×等温扩增缓冲液II、MgSO4、dNTPMix和Bst3.0DNA聚合酶;所述PfAgo检测试剂包括MnCl2、10×PfAgo核酸内切酶反应缓冲液和PfAgo核酸内切酶;所述LAMP扩增组合物和所述LAMP扩增试剂组成LAMP扩增体系,所述LAMP扩增体系总体积为25μL,10×等温扩增缓冲液II2.5μL,100mM的MgSO41μL,10mM的dNTPMix3.5μL,10μM的内引物FIP和BIP分别加入3μL,10μM的外引物F3和B3分别加入0.5μL,8000UmL的Bst3.0DNA聚合酶0.75μL,待检核酸2µL,加ddH2O补足至25µL;所述PfAgo切割组合物和所述PfAgo检测试剂组成PfAgo检测体系,所述PfAgo检测体系总体积为20μL,20μM的gDNAgF5和gT5分别加入2μL,20μM的探针Pb21μL,40mM的MnCl20.5μL,10×PfAgo核酸内切酶反应缓冲液2μL,200UμL的PfAgo核酸内切酶2μL,LAMP产物4μL,加ddH2O补足至20µL。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人南京市食品药品监督检验院,其通讯地址为:211100 江苏省南京市江宁区文芳路199号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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