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申请/专利权人：淮安市第一人民医院

摘要：本发明公开了一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，该方法以维生素B1、维生素B2、维生素B6为对照品，精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，即得对照品与供试品的图谱，将得到的图谱进行处理，对供试品溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6进行定性和定量，进而计算得普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量。本发明检测方法各色谱峰分离较好，基线平稳，峰型好，重复性较好，该方法具有良好的线性关系、精密度、稳定性、回收率，能够准确检测普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的成分含量，达到对普庆溶液进行质量控制的目的。

主权项：一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，其特征在于，包括如下步骤：对照品溶液的制备：称取维生素B1对照品、维生素B2对照品、维生素B6对照品，加水溶解，制成每1mL含维生素B1 5.0μg、维生素B2 1.0μg、维生素B6 1.8μg的混合对照品溶液；供试品溶液的制备：量取普庆溶液，过滤即得供试品溶液；色谱条件如下：色谱柱：waters 氨基键合硅胶色谱柱5μm 4.6×250 mm；流动相：乙腈:30mmolL磷酸二氢钾=75:25；流速：0.9mLmin ~1.1mLmin；检测波长：264nm～268nm 、438nm～442nm 、324nm～328nm；柱温：35℃~45℃；进样量：8μL ~12μL；理论塔板数：以维生素B2峰计算大于等于2000；检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，即得对照品与供试品的图谱，对照维生素B1、维生素B2、维生素B6线性回归方程，对供试品溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6进行定性和定量，进而计算得普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量。

全文数据：一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法技术领域[0001]本发明属于分析技术领域，具体涉及一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法。背景技术[0002]普庆溶液本院制剂室根据本院临床需要经批准而配制、自用的固定处方制剂，主要用于消炎止痛，治疗咽喉炎及消化系统炎症，疼痛等，尤其适用于放疗后食管炎症。[0003]普庆溶液的制备方法为：取10克盐酸普鲁卡因、800万单位硫酸庆大霉素加入水中，搅拌溶解，滤过，滤液加五维他口服溶液16.66ml和羟苯乙酯乙醇液3%IOml，加水定容至IOOOml，混匀，灭菌，灌装，即得。其中五维他口服溶液主要包含维生素B1、维生素出、维生素B6三种维生素，因此，对普庆溶液中维生素的含量进行控制，实现多种维生素的分离检测，对其质量控制具有重要的现实意义。发明内容[0004]本发明的目的在于提供一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，以测定普庆溶液中维生素出、维生素B2、维生素B6的含量，进而对普庆溶液进行质量控制。[0005]本发明是通过以下技术方案实现的：一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，包括如下步骤：对照品溶液的制备:称取维生素B1对照品、维生素出对照品、维生素B6对照品，加水溶解，制成每ImL含维生素Bi5.0yg、维生素B2l.Oyg、维生素B61.8yg的混合对照品溶液；供试品溶液的制备:量取普庆溶液，过滤即得供试品溶液；色谱条件如下：色谱柱:waters氨基键合娃胶色谱柱5μηι4.6X250mm;流动相：乙腈:30mmolL磷酸二氢钾=75:25;流速：〇.9mLmin〜l.lmLmin;检测波长：264nm〜268nm、438nm〜442nm、324nm〜328nm;柱温：35°C~45°C;进样量:8yL~12]iL；理论塔板数：以维生素出峰计算大于等于2000;检测方法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，即得对照品与供试品的图谱，对照维生素B1、维生素B2、维生素B6线性回归方程，对供试品溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6进行定性和定量，进而计算得普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量。[0006]所述维生素B1线性回归方程y=14921.23X+28787.36，r=0.9994,线性良好。[0007]所述维生素82线性回归方程7=10773.551+5204.824=0.9999，线性良好。[0008]所述维生素线性回归方程7=2861.7^+2348.57，^0.9993，线性良好。[0009]本发明进一步改进方案为：所述流动相为乙腈：30111111〇11磷酸二氢钾=75:25，柱温为40°：，检测波长为266腦、440nm、326nm〇[0010]本发明的更进一步改进方案为：所述流动相为乙腈：3〇111111〇11磷酸二氢钾=75:25，柱温为35°：，检测波长为264腦、438nm、324nm。[0011]本发明的再进一步改进方案为：所述流动相为乙腈：3〇111111〇11磷酸二氢钾=75:25，柱温为45°：，检测波长为268腦、442nm、328nm。[0012]本发明的有益效果为：本发明检测方法各色谱峰分离较好，基线平稳，峰型好，重复性较好，该方法具有良好的线性关系、精密度、稳定性、回收率，能够准确检测普庆溶液中维生素Bi、维生素B2、维生素B6的成分含量，达到对普庆溶液进行质量控制的目的。附图说明[0013]图1为实施例1色谱条件下所得的标准品谱图和供试品谱图；图2为实施例2色谱条件下所得的标准品谱图和供试品谱图；图3为实施例3色谱条件下所得的标准品谱图和供试品谱图；图4为实施例4所得色谱图；图5为维生素出峰面积值和浓度的线性关系图；图6为维生素出峰面积值和浓度的线性关系图；图7为维生素B6峰面积值和浓度的线性关系图。具体实施方式[0014]1、仪器高效液相:岛津公司LC-20AD型号高效液相。[0015]2、试剂：对照品维生素B1、维生素B2、维生素B6购于中国食品药品检定研究院。[0016]普庆溶液:淮安市第一人民医院自制。[0017]实施例1对照品溶液的制备:称取维生素B1对照品、维生素出对照品、维生素B6对照品，加水溶解，制成每ImL含维生素Bi5.0yg、维生素B2l.Oyg、维生素B61.8yg的混合对照品溶液；供试品溶液的制备:量取编号为160619的普庆溶液，过滤即得供试品溶液；色谱条件如下：色谱柱:waters氨基键合娃胶色谱柱5μηι4.6X250mm;流动相：乙腈:30mmolL磷酸二氢钾=75:25;流速：1.0mLmin;检测波长:266nm、440nm、326nm;柱温：40°C;进样量：IOyL;理论塔板数：以维生素出峰计算大于等于2000;检测方法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，如图1所示。[0018]根据检测结果，普庆溶液中维生素B1应不得少于^gml，维生素B2应不得少于0.8μgml，维生素Β,6应不得少于1.5ygml。[0019]实施例2对照品溶液和供试品溶液的制备同实施例1。[0020]色谱条件如下：色谱柱:waters氨基键合娃胶色谱柱5μηι4.6X250mm;流动相：乙腈:30mmolL磷酸二氢钾=75:25;流速：1.0mLmin;检测波长：264nm、438nm、324nm;柱温：35°C;进样量：10此；理论塔板数：以维生素出峰计算大于等于2000;检测方法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，如图2所示。[0021]根据检测结果，普庆溶液中维生素B1应不得少于^gml，维生素B2应不得少于0.8μgml，维生素Β,6应不得少于1.5ygml。[0022]实施例3对照品溶液和供试品溶液的制备同实施例1。[0023]色谱条件如下：色谱柱:waters氨基键合娃胶色谱柱5μηι4.6X250mm;流动相：乙腈:30mmolL磷酸二氢钾=75:25;流速：1.0mLmin;检测波长：268nm、442nm、328nm;柱温：45°C;进样量：10此；理论塔板数：以维生素出峰计算大于等于2000;检测方法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，如图3所示。[0024]根据检测结果，普庆溶液中维生素B1应不得少于^gml，维生素B2应不得少于0.8μgml，维生素Β,6应不得少于1.5ygml。[0025]实施例4干扰试验对照品溶液和供试品溶液的制备同实施例1。[0026]全辅料溶液的制备：取1克盐酸普鲁卡因、80万单位硫酸庆大霉素，加水定容至IOOml，摇勾，过滤即得；色谱条件同实施例1。[0027]检测方法:精密吸取对照品溶液、全辅料溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，记录图谱，如图4所示。[0028]根据测量结果，辅料在主峰位置均无吸收峰，对含量测定无干扰。[0029]实施例5维生素B1线性回归方程将对照品维生素也分别配制成1.17ygml〜7.00ygml的10个不同浓度的标准溶液，按照实施例1的色谱条件，各精密量取IOyL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值（S对浓度（C进行线性回归，求得维生素Bl的线性回归方程：y=14921.23X+28787.36，r=0.9994，线性良好。并以峰面积值S对浓度C作图，得一直线图，见图5。[0030]实施例6维生素B2线性回归方程将对照品维生素出分别配制成0.24ygml〜1.43ygml的10个不同浓度的标准溶液，按照实施例1的色谱条件，各精密量取IOyL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值S对浓度C进行线性回归，求得维生素B2的线性回归方程:y=10773.55X+5204.82，r=0.9999，线性良好。并以峰面积值S对浓度C作图，得一直线图，见图6。[0031]实施例7维生素B6线性回归方程将对照品维生素B6分别配制成0.77ygml〜2.70ygml的10个不同浓度的标准溶液，按照实施例1的色谱条件，各精密量取IOyL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值S对浓度C进行线性回归，求得维生素Bl的线性回归方程:y=2861.70X+2348.57，r=0.9993，线性良好。并以峰面积值S对浓度C作图，得一直线图，见图7。[0032]实施例8进样精密度试验对照品溶液制备方法和色谱条件同实施例1，取对照品溶液，连续进样5次，记录色谱图，测定结果见表1。[0033]表1进样精密度试验结果结论：由表1可见，试验结果维生素B1RSD%为0.2%n=5、维生素B2RSD%为0.9%n=5、维生素B6RSD%为1.0%n=5，表明进样精密度较好。[0034]实施例9，回收率试验分别取维生素B1、维生素B2、维生素B6配成标准溶液，各样品按照实施例1的色谱条件和检测方法测定，计算回收率，测定结果见表2，表3，表4。[0035]表2维生素B1回收率试验结果表3维生素B2回收率试验结果表4维生素B6回收率试验结果结论：由表2，表3，表4可见，维生素出平均回收率为100.4%，RSD为1.3%，维生素B2平均回收率为99.2%，RSD为1.45%，维生素B6平均回收率为82.7%，RSD为1.68%，表明回收率较好。[0036]实施例10重复性试验按照实施例1的色谱条件，取批号为160619的样品6份，分别过滤精密称定，测定结果见表5〇[0037]表5重复性测定结果n=6结论：由表5可见，试验结果维生素B2RSD为2.2%，维生素B6RSD为2.6%，维生素B1RSD为2.5%表明重复性较好。[0038]实施例11色谱条件耐用性流速变化按照实施例1的实验方法，将流速变为:0.9mlmin、I.lmlmin，考察多种维生素之间的峰分离度，结果见表6表6流速变化测试结果表结论:本色谱条件下测定，可见将流速在〇.9mlmin〜I.lmlmin条件允许范围内变化对分离度检测没有明显影响。[0039]实施例12色谱条件耐用性进样量变化按照实施例1的实验方法，将进样量变为:8μ1、12μ1考察多种维生素之间的峰分离度，结果见表7。[0040]表7进样量变化测试结果表结论:本色谱条件下测定，可见将流速在8μ1~12μ1条件允许范围内变化对分离度检测没有明显影响。

权利要求：1.一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，其特征在于，包括如下步骤：对照品溶液的制备：称取维生素B1对照品、维生素出对照品、维生素B6对照品，加水溶解，制成每ImL含维生素Bi5.0yg、维生素B2l.Oyg、维生素B61.8yg的混合对照品溶液；供试品溶液的制备:量取普庆溶液，过滤即得供试品溶液；色谱条件如下：色谱柱:waters氨基键合娃胶色谱柱5μηι4.6X250mm;流动相：乙腈:30mmolL磷酸二氢钾=75:25;流速：〇.9mLmin〜l.lmLmin;检测波长：264nm〜268nm、438nm〜442nm、324nm〜328nm;柱温：35°C~45°C;进样量：8yL~12]iL；理论塔板数：以维生素出峰计算大于等于2000;检测方法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，即得对照品与供试品的图谱，对照维生素B1、维生素B2、维生素B6线性回归方程，对供试品溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6进行定性和定量，进而计算得普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量。2.根据权利要求1所述的一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，其特征在于：所述流动相为乙腈:30mmolL磷酸二氢钾=75:25,柱温为40°C，检测波长为266nm、440nm、326nm〇3.根据权利要求1所述的一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，其特征在于：所述流动相为乙腈:30mmolL磷酸二氢钾=75:25,柱温为35°C，检测波长为264nm、438nm、324nm〇4.根据权利要求1所述的一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，其特征在于：所述流动相为乙腈:30mmolL磷酸二氢钾=75:25,柱温为45°C，检测波长为268nm、442nm、328nm〇

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