申请/专利权人：暨南大学

申请日：2008-10-07

公开（公告）日：2014-08-06

公开（公告）号：CN101401933B

主分类号：A61K38/48(2006.01)I

分类号：A61K38/48(2006.01)I;A61K9/08(2006.01)I;A61K9/19(2006.01)I;A61P11/00(2006.01)I;A61P43/00(2006.01)I

优先权：

专利状态码：失效-未缴年费专利权终止

法律状态：2024.06.28#未缴年费专利权终止;2014.08.06#授权;2009.06.03#实质审查的生效;2009.04.08#公开

摘要：本发明公开FGFR2IIIc胞外段在制备预防、治疗特发性肺纤维化药物中的应用。FGFR2IIIc可结合FGF2，降低其有效浓度，从而抑制纤维化进程，本发明将FGFR2IIIc用于制备预防和或治疗特发性肺纤维化药物，能够起到较好的预防、治疗作用。本发明的FGFR2IIIc胞外段一般以药物组合物的形式使用，这种组合物含有FGFR2IIIc胞外段和可药用辅料；FGFR2IIIc胞外段的用量可根据病情严重程度、治疗时间而定，一般注射给药每次250—300μg，每天1—2次。本发明的药物组合物可制成冻干粉针剂或注射液剂两种剂型，通过静脉注射使用。

主权项：FGFR2IIIc胞外段在制备预防、治疗特发性肺纤维化药物中的应用；所述FGFR2IIIc胞外段为按如下步骤制备的片段：1目的基因FGFR2IIIc的重叠延伸法全基因合成；2FGFR2IIIc点突变型的构建；3用Nde I和BamH I双酶切FGFR2IIIc基因与载体，连接构建重组载体，转化宿主菌，构建FGFR2IIIc基因工程菌；4培养FGFR2IIIc基因工程菌，分离、清洗、溶解包涵体得到包涵体溶解液；5纯化包涵体；6复性；7超滤、冻干后得到可溶性FGFR2IIIc胞外段；其中步骤1所述目的基因FGFR2IIIc的重叠延伸法全基因合成为根据FGF受体野生型胞外段截短型氨基酸序列，按照大肠杆菌密码子偏好性原则设计四对引物，首先以引物F1、R1互为模板扩增，然后以第一轮扩增的产物作为模板，F2、R2作为引物进行第二轮扩增，以第二轮扩增产物为模板，F3、R3作为引物进行第三轮扩增，以第三轮扩增产物为模板，F4、R4作为引物进行第四轮扩增；引物F1为：5'‑GGAAAATGAATATGGTTCTATTAATCATACCTATCATCTGGATGTTGTGGAACGTTCGCCTCATCGTCCGATTCTGCAGGCAGGTCTGCCGGCAAATGCGTCTACC‑3'；引物R1为：5'‑TTTTTTTCAACATGTTTAATCCACTGAATATGCGGCTGCGCATCGCTATAAACTTTACAAACAAATTCAACATCACCACCAACAACGGTAGACGCATTTGCCGGCA‑3'；引物F2为：5'‑GGTGGTTATAAAGTTCGTAATCAGCATTGGAGCCTGATTATGGAAAGCGTTGTTCCGTCTGATAAAGGTAATTATACCTGTGTGGTGGAAAATGAATATGGTTCTA‑3'；引物R2为：5'‑CTTCAATTTCTTTATCGGTGGTATTAACACCCGCCGCTTTCAGAACTTTCAGATACGGCAGACCATCCGGACCATATTTGCTACCATTTTTTTCAACATGTTTAAT‑3'；引物F3为：5’‑AATTTCGTTGTCCGGCGGGTGGTAATCCGATGCCGACCATGCGTTGGCTGAAAAATGGTAAAGAATTTAAACAGGAACATCGTATTGGTGGTTATAAAGTTCGTAA‑3'；引物R3为：5’‑AGAATGAAAAGAAATACCAATAGAATTACCCGCCAGACAGGTATATTCACCCGCATCTTCAAAGGTAACATTACGAATATACAGAACTTCAATTTCTTTATCGGTG‑3'；引物F4为：5’‑GGAATTCAAACGTGCGCCGTATTGGACCAATACCGAAAAAATGGAAAAACGTCTGCATGCAGTTCCGGCAGCAAATACCGTGAAATTTCGTTGTCCGGCGGGT‑3'；引物R4为：5’‑CGCGTCATTATTCCAGATAATCCGGAGACGCGGTAATTTCTTTTTCACGACCAGGTGCCGGCAGAACGGTCAGCCACGCAGAATGAAAAGAAATACCAA‑3'；步骤2中所述FGFR2IIIc点突变型的构建具体如下：步骤1得到的目的基因FGFR2IIIc按步骤3操作，得到野生型阳性质粒；以引物F4和突变引物M252+253_R为扩增引物，野生型阳性质粒为模板，进行PCR，得到体系1产物；以突变引物M252+253_F和引物R4为扩增引物，野生型阳性质粒为模板，进行PCR，得到体系2产物；将体系1产物和体系2产物等体积混合，使用引物F4和引物R4扩增，得到FGFR2IIIc点突变型产物；突变引物M252+253_F为：5’‑TGGAACGTTGGCGTCATCGTCCGA‑3’；突变引物M252+253_R为：5’‑TCGGACGATGACGCCAACGTTCCA‑3’步骤6中所述复性为采用凝胶层析法，其中所使用的复性液组成为：10‑100mmolL HEPES+0.5‑10mmolL EDTA+10‑1000mmolL NaCl+10‑50mmolL L‑胱氨酸，pH6～8.5。

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权利要求：

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