申请/专利权人：平顶山学院

申请日：2019-08-27

公开（公告）日：2019-10-18

公开（公告）号：CN110343191A

主分类号：C08B37/00(20060101)

分类号：C08B37/00(20060101);A23L2/39(20060101);A23L33/125(20160101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2022.09.02#发明专利申请公布后的驳回;2019.11.12#实质审查的生效;2019.10.18#公开

摘要：伏牛山金钗石斛多糖的提取方法，包括以下步骤：（1）伏牛山金钗石斛粗多糖的制备；（2）蛋白去除处理；（3）脱色处理；（4）小分子去除处理；（5）将已除去小分子的粗多糖溶液加无水乙醇并调节乙醇浓度70%，4℃静置过夜，在8000rmin下离心15min，收集沉淀，得到优化后伏牛山金钗石斛多糖。本发明具有操作方法简单，便于工业化批量生产，提高伏牛山金钗石斛多糖的提取含量及纯度，产品质量大大提高，用该多糖制备固体饮料，有助于提高伏牛山金钗石斛的经济价值。

主权项：1.伏牛山金钗石斛多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤，（1）伏牛山金钗石斛粗多糖的制备；（2）蛋白去除处理；（3）脱色处理；（4）小分子去除处理；（5）将已除去小分子的粗多糖溶液加无水乙醇并调节乙醇浓度70%，4℃静置过夜，在8000rmin的转速下离心15min，收集沉淀，得到优化后伏牛山金钗石斛多糖。

全文数据：伏牛山金钗石斛多糖的提取及制备固体饮料的方法技术领域本发明属于天然药用植物提取有效成分技术领域，具体涉及一种伏牛山金钗石斛多糖的提取及制备固体饮料的方法。背景技术金钗石斛位居中药材九大仙草之一，是我国古文献中最早记载的兰科植物之一。1500年以前的《神农本草经》中就有记载。千年以来它一直和灵芝，人参，冬虫夏草等一样被列为上品中药。伏牛山区是我国中草药资源的天然宝库，豫西南地处南北气候过渡带，伏牛山区中草药资源既分享了同类的代表性，有具有自身的特殊性。伏牛山金钗石斛俗称药黄金，性寒，味甘，淡，微咸。野生伏牛山金钗石斛生于伏牛山海拔1000-2000米石壁上，茎丛生。伏牛山金钗石斛主要分布在豫西南的西峡、内乡、南召、鲁山等县内，具有滋阴润肺，益胃补肾，建脑明目等作用，是降火良药。伏牛山金钗石斛在生津止渴，补五脏虚劳，清肺止咳，伏牛山金钗石斛有防感冒，抗疲劳等方面具有显著功效。伏牛山金钗石斛兰能显著提高超氧化物歧华酶水平，降低过氧化脂质，调节脑单胺类神经介质水平，抑制类似单胺氧化酶（MAO），起到延缓衰老的作用。伏牛山金钗石斛兰含有酯类成分，具有活血化瘀、扩张血管及抗血小板凝结，治疗血栓闭塞脉搏管炎，脑血栓形成，动脉硬化性闭塞等作用。伏牛山金钗石斛兰中提取的菲类和联苄类物质，有抗肺癌、卵巢腺癌和前髓细胞白血病的作用。伏牛山金钗石斛能促进T细胞生长和淋巴细胞产生抑制因子，起到增强免疫的作用。伏牛山金钗石斛的醋酸乙酯提取物对人体肺癌细胞、人体卵巢腺癌细胞、人体早幼粒细胞白血病具有显著的细胞毒性作用。多糖是石斛的主要药理活性成分，但对于伏牛山金钗石斛多糖的研究，起步相对较晚，特别是对于多糖的质量控制，含量，结构以及药理活性方面。随着多糖药物在医学上的研究及应用，多糖药物逐步被开发和利用。多糖是金钗石斛的主要成分，其含量相对较高，但多糖的含量受环境和疆域的影响比较大。近些年伏牛山金钗石斛多糖具有显著免疫增强活性和抗衰老、抗辐身等多种功效备受关注。目前，对伏牛山金钗石斛多糖的制备方法采用以下步骤：a.称取伏牛山金钗石斛粉末500g，按照液料比1:20加入蒸馏水10L，搅拌混匀；b.搅拌液随机分为10等份，每份250W声波辅助提取3次，将3次提取液合并定容至容量瓶中;c.将置于容量瓶中超声提取液摇匀，准确量取提取液至离心管中，按照1:5比例加入95%乙醇，摇匀；d.4℃冷藏18h，取出后5000rmin离心30min，弃上清留沉淀；e.沉淀按照1:5比例加入80%乙醇，洗涤2次；f.放置4h后，5000rpm离心20min，收集沉淀，得到伏牛山金钗石斛粗多糖，冷冻干燥保存。发明内容本发明为了解决现有技术中的不足之处，提供一种便于操作、工艺简单、提取多糖纯度高及含量高的伏牛山金钗石斛多糖的提取及制备固体饮料的方法。为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：伏牛山金钗石斛多糖的提取方法，包括以下步骤，（1）伏牛山金钗石斛粗多糖的制备；（2）蛋白去除处理；（3）脱色处理；（4）小分子去除处理；（5）将已除去小分子的粗多糖溶液加无水乙醇并调节乙醇浓度70%，4℃静置过夜，在8000rmin下离心15min，收集沉淀，得到优化后伏牛山金钗石斛多糖。步骤（1）具体为包括以下工序：a.称取伏牛山金钗石斛粉末500g，按照料液重量比为1:20加入蒸馏水10L，搅拌混匀；b.将搅拌液随机分为10等份，采用250W声波对每份搅拌液辅助提取3次，将超声提取液合并定容至容量瓶中；c.将置于容量瓶中的超声提取液摇匀，准确量取超声提取液至离心管中，按照体积比为1:5比例加入95%的乙醇，然后摇匀；d.将离心管放置在4℃环境下冷藏18h后，取出以转速为5000rmin离心30min，弃上清留沉淀；e.沉淀按照重量比为1:5比例加入80%乙醇，洗涤2次；f.放置4h后，在5000rpm的转速下离心20min，收集沉淀，即得到伏牛山金钗石斛粗多糖，冷冻干燥保存。步骤（2）包括以下工序，Ⅰ.先加入蒸馏水溶解伏牛山金钗石斛粗多糖，按重量比为1:3的比例加入木瓜蛋白酶，接着以37℃的水浴酶解5h，然后以90℃水浴灭酶，酶解和灭酶过程重复2次；Ⅱ.酶解和灭酶后加入清除试剂慢速搅拌2h，在15℃静置10min，用离心机以转速为10000rmin离心15min，取上层淡黄色上清液，完成伏牛山金钗石斛粗多糖的蛋白去除处理。清除试剂采用氯仿和正丁醇的混合溶液，氯仿与正丁醇的体积比为4:1。步骤（3）具体为包括以下工序：先对已脱蛋白的淡黄色上清液调节pH到8.0，然后在搅拌下加入20%H2O2，使多糖溶液的浓度达到8%，并控制温度在40℃，在磁力搅拌器中搅拌24h,完成伏牛山金钗石斛多糖的脱色处理。步骤（4）具体为包括以下工序：将透析袋清洗干净，装入脱色后多糖溶液，然后将透析袋置于磁力搅拌器上透析24h，完成伏牛山金钗石斛多糖中的小分子去除处理。伏牛山金钗石斛多糖制备固体饮料的方法，取一定量的伏牛山金钗石斛多糖，添加柠檬酸和木糖醇，拌匀后得到伏牛山金钗石斛多糖固体饮料。伏牛山金钗石斛多糖制备固体饮料的方法，取一定量的伏牛山金钗石斛多糖，添加白砂糖、麦芽糊精和环状糊精，拌匀后得到伏牛山金钗石斛多糖固体饮料。采用上述技术方案，本发明具有操作方法简单，便于工业化批量生产，提高伏牛山金钗石斛多糖的提取含量及纯度，产品质量大大提高，用该多糖制备固体饮料，有助于提高伏牛山金钗石斛的经济价值。具体实施方式伏牛山金钗石斛多糖的提取方法，包括以下步骤，（1）伏牛山金钗石斛粗多糖的制备；（2）蛋白去除处理；（3）脱色处理；（4）小分子去除处理；（5）将已除去小分子的粗多糖溶液加无水乙醇并调节乙醇浓度70%，4℃静置过夜，在8000rmin下离心15min，收集沉淀，得到优化后伏牛山金钗石斛多糖。步骤（1）具体为包括以下工序：a.称取伏牛山金钗石斛粉末500g（河南联源生物科技有限公司提供），按照料液重量比为1:20加入蒸馏水10L，搅拌混匀；b.将搅拌液随机分为10等份，采用250W声波对每份搅拌液辅助提取3次，将超声提取液合并定容至容量瓶中；c.将置于容量瓶中的超声提取液摇匀，准确量取超声提取液至离心管中，按照体积比为1:5比例加入95%的乙醇，然后摇匀；d.将离心管放置在4℃环境下冷藏18h后，取出以转速为5000rmin离心30min，弃上清留沉淀；e.沉淀按照重量比为1:5比例加入80%乙醇，洗涤2次；f.放置4h后，在5000rpm的转速下离心20min，收集沉淀，即得到伏牛山金钗石斛粗多糖，冷冻干燥保存。步骤（2）包括以下工序，Ⅰ.先加入蒸馏水溶解伏牛山金钗石斛粗多糖，按重量比为1:3的比例加入木瓜蛋白酶，接着以37℃的水浴酶解5h，然后以90℃水浴灭酶，酶解和灭酶过程重复2次；Ⅱ.酶解和灭酶后加入清除试剂慢速搅拌2h，在15℃静置10min，用离心机以转速为10000rmin离心15min，取上层淡黄色上清液，完成伏牛山金钗石斛粗多糖的蛋白去除处理。清除试剂采用氯仿和正丁醇的混合溶液，氯仿与正丁醇的体积比为4:1。步骤（3）具体为包括以下工序：先对已脱蛋白的淡黄色上清液调节pH到8.0，然后在搅拌下加入20%H2O2，使多糖溶液的浓度达到8%，并控制温度在40℃，在磁力搅拌器中搅拌24h,完成伏牛山金钗石斛多糖的脱色处理。步骤（4）具体为包括以下工序：将透析袋清洗干净，装入脱色后多糖溶液，然后将透析袋置于磁力搅拌器上透析24h，完成伏牛山金钗石斛多糖中的小分子去除处理。本实施例与背景技术中采用不同方法制备的多糖，多糖生成含量比较，相比之下本实施例效果更好，具体见下表。以本实施例的提取的多糖为例，本发明从伏牛山金钗石斛中提取的多糖制备固体饮料的方法，包括以下两种实施方式：实施方式一：伏牛山金钗石斛多糖添加量分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0g五种类型，添加柠檬酸添加量为0.2g，木糖醇添加后补足五种伏牛山金钗石斛多糖固体饮料总重量为3g。实施方式二：伏牛山金钗石斛多糖添加量分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0g，添加白砂糖0.2g,麦芽糊精0.2g,环状糊精添加后补足五种伏牛山金钗石斛多糖固体饮料总重量为3g。不同方法制得伏牛山金钗石斛多糖固体饮料的感官评分，相比之下实施方式一的效果更好，具体见下表。本实施例并非对本发明的形状、材料、结构等作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的保护范围。

权利要求：1.伏牛山金钗石斛多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤，（1）伏牛山金钗石斛粗多糖的制备；（2）蛋白去除处理；（3）脱色处理；（4）小分子去除处理；（5）将已除去小分子的粗多糖溶液加无水乙醇并调节乙醇浓度70%，4℃静置过夜，在8000rmin的转速下离心15min，收集沉淀，得到优化后伏牛山金钗石斛多糖。2.根据权利要求1所述的伏牛山金钗石斛多糖的提取方法，其特征在于：步骤（1）具体为包括以下工序：a.称取伏牛山金钗石斛粉末500g，按照料液重量比为1:20加入蒸馏水10L，搅拌混匀；b.将搅拌液随机分为10等份，采用250W声波对每份搅拌液辅助提取3次，将超声提取液合并定容至容量瓶中；c.将置于容量瓶中的超声提取液摇匀，准确量取超声提取液至离心管中，按照体积比为1:5比例加入95%的乙醇，然后摇匀；d.将离心管放置在4℃环境下冷藏18h后，取出以转速为5000rmin离心30min，弃上清留沉淀；e.沉淀按照重量比为1:5比例加入80%乙醇，洗涤2次；f.放置4h后，在5000rpm的转速下离心20min，收集沉淀，即得到伏牛山金钗石斛粗多糖，冷冻干燥保存。3.根据权利要求1或2所述的伏牛山金钗石斛多糖的提取方法，其特征在于：步骤（2）包括以下工序，Ⅰ.先加入蒸馏水溶解伏牛山金钗石斛粗多糖，按重量比为1:3的比例加入木瓜蛋白酶，接着以37℃的水浴酶解5h，然后以90℃水浴灭酶，酶解和灭酶过程重复2次；Ⅱ.酶解和灭酶后加入清除试剂慢速搅拌2h，在15℃静置10min，用离心机以转速为10000rmin离心15min，取上层淡黄色上清液，完成伏牛山金钗石斛粗多糖的蛋白去除处理。4.根据权利要求3所述的伏牛山金钗石斛多糖的提取方法，其特征在于：清除试剂采用氯仿和正丁醇的混合溶液，氯仿与正丁醇的体积比为4:1。5.根据权利要求3所述的伏牛山金钗石斛多糖的提取方法，其特征在于：步骤（3）具体为包括以下工序：先对已脱蛋白的淡黄色上清液调节pH到8.0，然后在搅拌下加入20%H2O2，使多糖溶液的浓度达到8%，并控制温度在40℃，在磁力搅拌器中搅拌24h,完成伏牛山金钗石斛多糖的脱色处理。6.根据权利要求5所述的伏牛山金钗石斛多糖的提取方法，其特征在于：步骤（4）具体为包括以下工序：将透析袋清洗干净，装入脱色后多糖溶液，然后将透析袋置于磁力搅拌器上透析24h，完成伏牛山金钗石斛多糖中的小分子去除处理。7.采用权利要求1提取的伏牛山金钗石斛多糖制备固体饮料的方法，其特征在于：取一定量的伏牛山金钗石斛多糖，添加柠檬酸和木糖醇，拌匀后得到伏牛山金钗石斛多糖固体饮料。8.采用权利要求1提取的伏牛山金钗石斛多糖制备固体饮料的方法，其特征在于：取一定量的伏牛山金钗石斛多糖，添加白砂糖、麦芽糊精和环状糊精，拌匀后得到伏牛山金钗石斛多糖固体饮料。

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