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申请/专利权人：东南大学
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体的是Gpm6b调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。分化方法的步骤：OC‑1细胞培养；siRNA敲低Gpm6b基因，采用N1301、N885、N1082三种不同的siRNA敲减OC‑1细胞中的Gpm6b基因；Lgr5+祖细胞的分离培养及Gpm6b基因敲低，Lgr5+祖细胞消化成单细胞后，采用流式细胞分选技术进行分选，经培养后再Gpm6b基因敲低；Gpm6b基因敲低对Lgr5+祖细胞增殖分化的影响，采用细胞成球实验、EdU染色实验和免疫荧光实验研究Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞增殖分化的影响，再评估Lgr5+细胞增殖、分化为毛细胞的能力；数据分析，采用GraphPadPrism6进行数据统计分析。本发明敲低Gpm6b基因后对于Lgr5+细胞成球有抑制作用，即Gpm6b敲低抑制Lgr5+细胞增殖。而Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞分化再生毛细胞无调控作用。
主权项：1.Gpm6b调控内耳干细胞增殖分化方法，其特征在于，包括以下步骤：一、OC-1细胞培养将小玻片放入24孔皿中，加1mlddH2O或PBS，吹洗3遍，紫外照射半小时后进行种细胞，细胞量为200ul大皿，画“8”字或“十”字分散细胞，置于33℃、5％CO2的培养箱中；二、siRNA敲低Gpm6b基因采用N1301、N885、N1082三种不同的siRNA敲减OC-1细胞中的Gpm6b基因；三、Lgr5+祖细胞的分离培养及Gpm6b基因敲低消化成单细胞后，采用流式细胞分选技术进行分选，经培养后再Gpm6b基因敲低；四、Gpm6b基因敲减对Lgr5+祖细胞增殖分化的影响采用细胞成球实验、EdU染色实验和免疫荧光实验研究Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞增殖分化的影响，再评估Lgr5+细胞增殖、分化为毛细胞的能力；五、数据分析采用GraphPadPrism6进行数据统计分析。
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百度查询： 东南大学 Gpm6b调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用
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