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申请/专利权人：桂林市农业科学研究中心

摘要：本发明公开了间歇浸没式荔浦芋组培苗快速增殖的方法，涉及涉及荔浦芋培苗种植方法领域，针对荔蒲芋沿用传统的球茎作为繁殖种源,不仅浪费产品，增加成本,而且还要解决贮藏休眠及发芽两个难题且还要解决贮藏休眠及发芽两个难题，现提出如下方案，S1：建立间歇浸没液体培育系统，包括：基本培养基、激素配比、外植体大小和培养容器；S2：选择符合荔浦芋组培苗快速生长的光质：以一叶状茎带一芽为外植体，分别置于玫瑰红600‑690nm、橙红色590一650nm、黄色530‑600nm，绿色490‑550nm、蓝色400‑460nm，5种不同波长光质下培养白光为对照。本发明的培养基配方适合于使用间歇浸没式培养增殖荔浦芋组培苗，在本发明的培养基配方和培养条件下，增殖率远远高于传统组培方法。

主权项：1.间歇浸没式荔浦芋组培苗快速增殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：建立间歇浸没液体培育系统，包括：基本培养基、激素配比、外植体大小和培养容器；S2：选择符合荔浦芋组培苗快速生长的光质：以一叶状茎带一芽为外植体，分别置于玫瑰红600-690nm、橙红色590一650nm、黄色530-600nm，绿色490-550nm、蓝色400-460nm，5种不同波长光质下培养白光为对照，观察不同波长光质对荔浦芋组培苗增殖的影响，其中玫瑰红光质对诱导荔浦芋组培苗形成有效分蘖的增殖效果最佳且产生的分蘖苗的质量也最好，经过50d培养分蘖数可高达68.5，繁殖系数达68.53-22.8；S3：观察不同糖浓度和水杨酸对荔浦芋组培苗生长及移栽成活率：在荔浦芋组培苗增殖过程中：10％的蔗糖浓度是最有利于荔浦芋组培苗增殖，其增殖系数为9.4，而当培养基糖浓度为12％时，荔浦芋组培苗生长质量最好，苗壮且移栽成活率大大提高，2-3mgL的SA与10％的蔗糖配合使用效果最好，此时荔浦芋组培苗增殖效果显著，形成的丛芽壮，大小整齐-致，而且可以诱导产生大量的荔浦芋原球茎；S4：所述间歇浸没式生物反应器结构包括：培养瓶、储液瓶、蠕动泵，所述储液瓶通过硅胶软管与培养瓶连接，通过蠕动泵的作用将液体培养基从储液瓶抽到培养瓶，再从培养瓶抽回储液瓶；所述培养瓶包括容器主体以及密封盖体，所述密封盖体顶部设有两个软管通孔；S5：接种与继代增殖培养：1继代培养中不定芽增殖的最适培养基为:12MS220mgLCaCl22H2O，+6-BA1.0mgL+KT0.5mgL+NAA0.4mgL+750mgLCH，增殖系数为4.11,芽苗整齐健壮；2继代培养中拟球茎诱导的适宜培养基为:MS440mgLCaCl-2H2O+6-BA1.0mgL+KT0.5mgL+NAA0.4mgL+500mgLCH,CLS的诱导率为80％左右，球茎基部直径较大，芽苗健壮；其中，荔浦芋外植体制备方法如下：取荔浦芋茎尖分生组织培养，并将诱导出的不定芽切为单芽或双芽，剥离老叶，并保留芽体1～2cm，即得，荔浦芋外植体的接种密度为：每升培养液中接种10～15株外植体；继代培养条件为：温度28±1℃，光照1500Lx，12小时光照，12小时黑暗，设定间歇浸没式生物反应器的相关参数，同时间歇培养的间歇频率为每4小时一次，培养时间为5分钟，培养时间30天。S4：生根培养：继代增殖培养结束后，将间歇浸没式生物反应器中的培养基替换为生根液体培养基，并继续进行生根培养，生根培养条件为：温度28±1℃，光照1500Lx，14小时光照，10小时黑暗，设定间歇浸没式生物反应器的相关参数，即间歇培养的间歇频率为每6小时一次，培养时间为3分钟，培养时间20天为宜；S5：生根苗移栽：生根培养结束后，将所得组培生根苗移栽至培养杯中育苗，并将所得种苗移栽至田地，生根苗放入灭菌后的潮土基质，在5～6℃环境中炼苗7～10d最佳，移栽时选择潮土和河沙混合基质8:2体积比，成活率达96％，出苗率为86％，组培苗就地栽培或移至原产地均可，成活率均高于95％，出苗率大于92％。

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