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申请/专利权人：北京群峰纳源健康科技有限公司

摘要：本发明公开了一种检测细菌16SrDNA全长的建库测序方法，通过在每个样品上加上分子标签UMI，分别扩增得到连接文库和拼接文库，对两个文库进行测序，通过识别UMI组合的方式提取数据，并组装出16SrDNA全长序列，进而比对数据库确定菌种种类。本发明的建库方法适合所有类型样本的菌群结构检测，能够将传统的菌群结构鉴定从“属”级别提升到“种”级别，与属水平相比较，种水平的优势，可以更准确的确定环境微生物的生态结构，便于深入研究，由此可对样本进行特定细菌菌种的检测。

主权项：1.一种检测细菌16SrDNA全长的建库测序方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）定量提取样本中菌群的总DNA；（2）以步骤（1）样本的DNA为模板，通过两端带有特异分子标签UMI的引物组PCR扩增16SrDNA全长，并为每一个原始扩增的16SrDNA全长加上特异的分子标签UMI，得到扩增产物：（2.1）采用带有UMI标签的第一组引物序列对所述样本的DNA进行第一轮PCR扩增，并进行第一次纯化，所述第一组引物序列如SEDIQNO：1-2所示；（2.2）采用第二组引物序列对第一次纯化产物进行第二轮PCR扩增，并进行第二次纯化，所述第二组引物序列如SEDIQNO：3-4所示；（3）将步骤（2.2）所得扩增产物用Tn5酶片段化，对片段化产物进行第一轮PCR扩增并纯化，扩增引物序列如SEDIQNO：5-7所示，对第一轮PCR扩增产物进行第二轮PCR扩增并纯化，扩增引物序列如SEDIQNO：8-9所示，由此构建拼接文库并标记为A-P；（4）将步骤（2.2）所得扩增产物环化连接，对连接产物进行第一轮PCR扩增，扩增引物如SEDIQNO：10-11所示，对第一轮PCR扩增产物进行第二轮PCR扩增并纯化，扩增引物如SEDIQNO：12-13所示，由此构建连接文库并标记为A-L；（5）将所述拼接文库A-P和所述连接文库A-L测序，得到拼接文库A-P和连接文库A-L的测序结果；（6）将步骤（5）的测序结果进行生物信息技术处理分析，通过识别UMI组合的方式，在拼接文库A-P和连接文库A-L中提取数据，并组装出16SrDNA全长序列，进而比对数据库确定菌种种类。

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