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申请/专利权人：中国人民解放军海军军医大学

摘要：本发明提供了沙蜇触手大、小刺丝囊的分离与毒液提取方法，大、小刺丝囊的分离包括沙蛰触手样品的采集、刺丝囊混合物提取、蔗糖溶液非连续密度梯度法初步分离、percoll溶液非连续密度梯度法细分四个步骤，初步分离中，采用80％、70％、50％和20％的蔗糖梯度溶液，细分中采用100％和30％的percoll梯度溶液。一方面，解决了单一的蔗糖溶液分离不彻底而无法精确开展后续大、小刺丝囊活性比较分析的难题；另一方面，由于大、小刺丝囊数量上差异悬殊，科研上所需样品量大，而percoll溶液价格昂贵，因此先采用蔗糖后进一步使用percoll分离也减轻了单一的percoll溶液分离造成的经济上的负担。

主权项：1.一种沙蜇触手大、小刺丝囊的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：沙蛰触手样品的采集沙蛰水母采集后，剪取其触手的红色部分，收集后保存在-80℃冰箱中；S2：刺丝囊混合物提取将沙蜇冷冻触手取出，捣碎后将匀浆液放置于4℃冰箱里，按比例加入4℃预冷的人工海水，搅拌自溶48h后，筛网过滤收集滤液，于4℃、1,000×g下离心，收集沉淀；所述人工海水由速溶海水晶、双蒸水以及MgCl2·6H2O配置而成，所述速溶海水晶的浓度为34gL，MgCl2·6H2O的浓度为5gL，S3：蔗糖溶液非连续密度梯度法初步分离分别配置浓度为80％、70％、50％和20％的蔗糖溶液，按照高密度向低密度逐层放置的先后顺序，从下至上依次缓慢加入80％、70％、50％和20％的蔗糖溶液，在最上层缓慢加入与各浓度蔗糖溶液体积相同的重悬后沉淀样品，4℃、1,000×g，离心30min后，分别吸取50％层的小刺丝囊和80％层的大刺丝囊，海水清洗，并于显微镜制片观察，得到大刺丝囊粗分离样品和小刺丝囊粗分离样品；S4：percoll溶液非连续密度梯度法细分分别配置浓度为100％和30％的percoll溶液，使用吸管按照高密度向低密度逐层放置的先后顺序，从下至上依次缓慢加入100％和30％的percoll溶液，在最上层缓慢加入与各浓度percoll溶液体积相同的大刺丝囊粗分离样品或者小刺丝囊粗分离样品，4℃、1,000×g离心15min，在30％的percoll溶液中吸取得到小刺丝囊溶液，在100％的percoll溶液中吸取得到大刺丝囊溶液，海水清洗后得到小刺丝囊和大刺丝囊。

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