买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：中国科学院昆明动物研究所

摘要：本发明公开了一种眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30的表达载体和表达产物及其构建制备方法，涉及一种可高效表达眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R的表达载体的构建与表达。眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R的表达载体由DAMP4载体蛋白，通过linker分别连接眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30N端到C端、C端到N端基因构建PET‑28a‑DAMP4‑F‑OH30、PET‑28a‑DAMP4‑F‑OH30R。通过该表达载体在TSsettaDE3ChemicallyCompetentCell表达感受态细胞中诱导表达可溶性产物和高效纯化可溶性表达产物的方法，从而获得有活性的体外抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R表达产物。该方法实现了抗菌肽OH‑CATH30从N‑C和从C—N的原核表达，实验流程简单易行，获得的重组抗菌肽在纯化后不经任何处理即具有明显的抑菌活性，经凝血酶酶切之后抑菌活性有了明显的提高。

主权项：1.一种眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30及OH-CATH30R重组抗菌肽的制备方法，包括以下步骤：S1：重组表达载体PET-28a-DAMP4-F-OH30和PET-28a-DAMP4-F-OH30R的构建所述的重组表达载体是由DAMP4载体蛋白，通过linker分别连接眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30N端到C端、C端到N端基因构建PET-28a-DAMP4-F-OH30、PET-28a-DAMP4-F-OH30R，具有凝血酶切割位点，重组表达载体诱导表达的重组蛋白均为140aa，重组蛋白DAMP4-F-OH-CATH30的编码核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示，重组蛋白DAMP4-OH-CATH30R的编码核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示；S2:表达菌株的获得：将S1的重组表达载体用热击法转化到大肠杆菌top10感受态细胞，分别得到含有眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30和OH-CATH30R的PET-28a-DAMP4-F-OH30阳性克隆菌株和PET-28a-DAMP4-F-OH30R阳性克隆菌株，将阳性克隆菌株分别摇菌提取质粒，再用热击法将重组表达载体PET-28a-DAMP4-F-OH30、PET-28a-DAMP4-F-OH30R分别转化至TSsettaDE3ChemicallyCompetentCell表达感受态细胞中，得到分别含重组表达载体PET-28a-DAMP4-F-OH30、PET-28a-DAMP4-F-OH30R的TSsettaDE3ChemicallyCompetentCell表达菌株；S3：重组表达工程菌的诱导表达：用将上述步骤S2得到的表达菌株进行诱导表达，得到表达产物DAMP4-F-OH-CATH30和DAMP4-OH-CATH30R；所述的诱导表达条件为：含重组表达载体PET-28a-DAMP4-F-OH30的表达菌株37℃、110rpm诱导表达6小时；含重组表达载体PET-28a-DAMP4-F-OH30R的表达菌株25℃、180rpm诱导表达12小时；S4：重组抗菌肽的分离、纯化：将上述S3步骤中表达产物经过离心收集菌体、菌体破碎后再经离心、分离纯化、透析、凝血酶酶切，即得重组表达抗菌肽OH-CATH30和OH-CATH30R；S5：重组抗菌肽抑菌活性的测定测定重组表达产物凝血酶酶切反应前和经过凝血酶酶切后得到的产物对大肠杆菌25922菌株的抑菌效果。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院昆明动物研究所 一种眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30的表达载体和表达产物及其构建制备方法