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申请/专利权人：深圳赫兹生命科学技术有限公司

摘要：本发明提供了一种FIPVN重组蛋白及所得快速检测FIPV感染的胶体金试纸条，属于生物检测技术领域。本发明提供的FIPVN重组蛋白，其氨基酸序列如SeqIDNo.1所示。本发明基于N蛋白高保守性及优良的免疫性，应用原核表达系统表达出FIPVN蛋白，并且利用该蛋白及其免疫幼猫后获得的多抗研发得到了胶体金试纸条以检测FIPV阴阳性血清，为建立FIPV快速诊断方法奠定了基础。

主权项：1.检测猫冠状病毒感染的胶体金试纸条，其特征在于，包括底板和吸附层；所述吸附层从加样端开始依次为样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，样品垫及胶体金标记垫由玻璃纤维棉制成；胶体金标记垫上吸附有胶体金标记的FIPVN重组蛋白；硝酸纤维素膜上设有质控线C和检测线T；吸水垫由吸水滤纸制成；所述FIPVN重组蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；所述胶体金标记垫上吸附的胶体金的颗粒直径为30-80nm，其与FIPVN重组蛋白的比例为20μg蛋白加入1mL胶体金溶液，所述胶体金标记垫中FIPVN重组蛋白的喷涂量为6μLcm；所述胶体金试纸条中检测到FIPV所需的FIPVN重组蛋白的量低至2.46μgmL；所述质控线C含有1μLcm的兔抗猫冠状病毒N蛋白多克隆抗体，所述检测线T含有1μLcm羊抗猫IgG抗体；所述检测线与质控线相距0.5cm，距硝酸纤维素膜的边距分别为1.0cm和1.5cm；所述FIPVN重组蛋白制备方法如下：通过对N蛋白进行二级机构以及NLS核定位信号分析，合成大小为1134bp的基因片段，通过对所述基因片段进行PCR扩增，得到重组N基因；将所得重组N基因与经相同酶切后的pET32a载体用连接酶连接，并转化到大肠杆菌T7shuffle感受态细胞，经氨苄西林抗性筛选阳性克隆，提取PCR鉴定阳性菌液质粒，经酶切鉴定得到阳性重组质粒pET32a-FIPV-N；将阳性重组质粒pET32a-FIPV-N转化到E.coliBL21感受态细胞，加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷进行诱导表达及纯化，得到FIPVN重组蛋白；所述胶体金试纸条的使用方法包括如下步骤：采集待检猫的血清样品，滴入胶体金试纸条样品垫处，水平放置3-5min观察结果；若硝酸纤维素膜处质控线C和检测线T显现两条红色条带，表示待检样品中含有FIPVN重组蛋白；若仅质控线C显现一条红色条带，表示待检样品中未检出FIPVN重组蛋白；若检测试纸条未显现任何条带表明检测操作不当或试纸条失效。

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