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申请/专利权人：武汉爱博泰克生物科技有限公司
申请日：2023-10-23
公开（公告）日：2024-03-08
公开（公告）号：CN117660273A
主分类号：C12N1/21
分类号：C12N1/21;C12N1/19;C12N15/53;C12N15/70;C12N15/81;C12N1/02;C12Q1/28;C12R1/84;C12R1/19
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.03.26#实质审查的生效;2024.03.08#公开
摘要：本发明提供一种高产高活性HRP的菌株及其快速筛选方法和应用，属于基因工程和微生物技术领域。本发明中通过构建包含HRP表达基因的重组载体，以该载体为模板进行易错PCR扩增产生突变体，将转化培养的菌株进行全部刮板提取质粒，直接进行转化筛选；然后将得到的随机突变质粒转化后进行扩大培养；再通过深孔板培养的方式进行挑菌诱导培养，通过凝胶电泳筛选出HRP高表达的菌株，并检测表达得到的HRP的活性；筛选出高表达HRP且HRP具有高活性的菌株。该菌株可用于大量制备高活性的HRP。该筛选方法减少了酶量损失和酶活性丧失，只得到单一的HRP且存在于菌液上清中，易于后期纯化；且该方法省时、省力、节约成本。
主权项：1.一种高产高活性HRP的菌株的快速筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1合成HRP表达基因，构建包含HRP表达基因的重组载体pPICZαA-IPA0130，以所述重组载体pPICZαA-IPA0130为模板进行易错PCR扩增；2将载体pPICZαA酶切，与步骤1中得到的易错PCR扩增片段连接，转化至第一感受态细胞，培养后进行质粒抽提，得到pPICZαAMtIPA0130随机突变质粒；3将所述pPICZαAMtIPA0130随机突变质粒进行线性化，转化至第二感受态细胞中进行扩大培养；4采用深孔板培养的方式将步骤3中培养得到的菌液进行挑菌诱导培养，通过凝胶电泳筛选出HRP高表达的菌株，并检测表达得到的HRP的活性；筛选出高表达HRP且HRP具有高活性的菌株。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 武汉爱博泰克生物科技有限公司 一种高产高活性HRP的菌株及其快速筛选方法和应用
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