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申请/专利权人：台州市食品药品检验研究院
申请日：2023-12-18
公开（公告）日：2024-03-19
公开（公告）号：CN117721235A
主分类号：C12Q1/6895
分类号：C12Q1/6895;C12Q1/6837;C12N15/11
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.03.19#公开
摘要：本发明公开了一种同时检测铁皮石斛、霍山石斛及其常见伪品的基因膜芯片检测方法，具体属于石斛品种鉴定技术领域，该方法包括如下步骤：S01、PCR引物及探针设计；S02、PCR扩增；S03、膜芯片制备；S04、杂交显色。通过使用该方法对石斛进行检测，可在3小时内完成石斛属、铁皮石斛、霍山石斛、流苏石斛、齿瓣石斛和石仙桃等源性成分的快速筛查，具有良好的重复性、特异性和灵敏度，本方法对靶标DNA核酸的整体检测限为0.1ngμL，对铁皮石斛中霍山石斛、流苏石斛、齿瓣石斛和石仙桃的掺伪检出限为1％质量比，对霍山石斛中铁皮石斛、流苏石斛、齿瓣石斛和石仙桃的掺伪检出限为1％质量比，可满足市场的检测需求。
主权项：1.一种同时检测铁皮石斛、霍山石斛及其常见伪品的基因膜芯片检测方法，其特征在于：包括如下步骤：S01、PCR引物及探针设计从数据库中筛选出铁皮石斛、霍山石斛及其常见混伪品的保守基因和特异性基因，分别选取铁皮石斛的ITS序列和霍山石斛的trnL-trnF序列设计两对特异性引物及对应探针；同时使用一对ITS通用引物对流苏石斛、齿瓣石斛、石仙桃及石斛属进行扩增，针对扩增产物分别设计特异性探针；对上述得到的所有上游引物进行5’-biotin修饰，对探针进行5’-NH2C6修饰，得到引物组和探针组；S02、PCR扩增同时使用铁皮石斛和霍山石斛双重PCR体系和ITS通用PCR体系对样品进行PCR扩增，得到PCR产物；S03、膜芯片制备按1.1cm×1.1cm尺寸裁好尼龙膜条，在双蒸水和15*SSC中分别浸泡15min，取出置于滤纸上60℃烘干，各探针按膜芯片探针布局图依次点制，得到检测用基因膜芯片；S04、杂交显色PCR产物于95℃解链变性5min后，低温放置3min以上，得到PCR变性产物；吸取20μLPCR变性产物至200μL杂交液中，由手动或MFS-24基因膜芯片检测工作站按下述杂交流程进行杂交及显色反应，经化学显色反应，可直观显示检测结果。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 台州市食品药品检验研究院 一种同时检测铁皮石斛、霍山石斛及其常见伪品的基因膜芯片检测方法
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