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申请/专利权人：华中农业大学
摘要：本发明涉及一种非组培枳高效毛状根转化方法，包括以下步骤：1.利用枳果实种子进行培养获得用于侵染的枳实生苗；2.制备供侵染所用的发根农杆菌菌液；3.将步骤1所获得的枳实生苗置于步骤2的发根农杆菌菌液中，随后在30‑40psi下真空渗透25min以上后转入含有蛭石基质的透气且保湿的培养容器中，在黑暗条件下培养3‑4天，随后转入16小时光照8小时黑暗条件下交替培养，诱导发根，获得转基因毛状根。本发明共培养15d左右就可以看到白色愈伤，25d左右就能得到转基因阳性毛状根，并且转基因毛状根诱导效率可以达到90％以上，耗时较短。
主权项：1.一种非组培枳高效毛状根转化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1.利用枳果实种子进行培养获得用于侵染的枳实生苗；步骤2.制备供侵染所用的发根农杆菌菌液；所述步骤2具体包括以下步骤：步骤2.1、将外源基因或是插入有外源基因的质粒转入发根农杆菌，并将发根农杆菌的菌液以1：200的比例接种到含抗生素的40-50mLLB液体培养基中，在28℃和200rmin摇床条件下培养12h以上，得到备用菌液；步骤2.2、将备用菌液在室温，4000rmin条件下离心5min，弃上清用40mLMT悬浮培养基重悬，加入50mgL乙酰丁香酮，调整农杆菌菌液OD600在0.6-1.0即得到供侵染所用的发根农杆菌菌液；步骤3.将步骤1所获得的枳实生苗置于步骤2的发根农杆菌菌液中，随后在30-40psi下真空渗透25min以上后转入含有蛭石基质的透气且保湿的培养容器中，在黑暗条件下培养3-4天，随后转入16小时光照8小时黑暗条件下交替培养，诱导发根，获得转基因毛状根。
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权利要求：
百度查询： 华中农业大学 一种非组培枳高效毛状根转化方法
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