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申请/专利权人：南方医科大学南方医院

摘要：本发明属于外泌体miRNA检测技术领域，具体公开了一种用于检测外泌体miRNA的MDTs‑CHA体系、电化学传感器及其应用。所述MDTs‑CHA体系包括N层相互叠加的T1结构和T2结构，T1结构包括一个DNA四面体DT1及两个发夹H1、H2，T2结构包括一个DNA四面体DT2及两个发夹H3、H4。本发明基于所述MDTs‑CHA体系构建了一种用于检测外泌体miRNA的电化学传感器，通过层叠、局域化的催化发夹组装反应，以MDTs作为电化学报告信号分子的载体，检测快速、灵敏且高效；MDTs‑CHA体系组装及合成方法简单，且稳定性好。本发明可以检测不同细胞系及血浆的外泌体miRNA，且由于MDTs‑CHA体系是由DNA链组装形成，具有较低的生物毒性和免疫原性，有利于其生物应用。

主权项：1.一种用于检测外泌体miR-1246的电化学传感器，其特征在于，所述电化学传感器包括MDTs-CHA体系、电极和电化学信号报告分子溶液；所述MDTs-CHA体系为多功能DNA四面体辅助催化发夹组装体系，所述MDTs-CHA体系包括双层相互叠加的T1结构和T2结构，所述T1结构包括一个DNA四面体DT1及两个发夹H1、H2，所述T2结构包括一个DNA四面体DT2及两个发夹H3、H4，所述发夹H1和H3含有与靶标miR-1246或触发链互补的区域，所述DT1含有游离的触发链I1，所述DT2含有游离的触发链I2，所述发夹H2和H4中还具有与捕获探针CP1互补的区域P链；变性退火后的发夹H1、H2与DNA四面体DT1在室温下共同孵育，变性退火后的发夹H3、H4与DNA四面体DT2在室温下共同孵育，使发夹与DNA四面体延长链相连接，形成MDTs-CHA体系；当靶标miR-1246或触发链存在时，所述T1结构上的CHA反应被启动，暴露出发夹H2上封闭的P链，P链与电极表面的捕获探针CP1特异性杂交，置换出与捕获探针CP1互补的捕获探针CP2链，此时触发链I1固定于电极表面，触发启动T2结构的CHA反应，暴露出发夹H4上封闭的P链和触发链I2，启动MDTs-CHA体系的T1、T2结构依次交替进行双层CHA循环反应；部分P链被锁定在发夹的茎结构中，只有在MDTs-CHA反应启动后才能完全释放出来与捕获探针结合，从而将MDTs-CHA固定在电极表面上；所述DNA四面体带有电化学信号报告分子，所述捕获探针通过捕获带有电化学信号报告分子的DNA四面体，使电化学信号扩增，用于外泌体miR-1246检测；所述DNA四面体DT1由四条单链S1、S2、S3、S4通过一步退火法合成，所述单链S1、S2、S3、S4的序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4所示；所述DNA四面体DT2由四条单链S5、S6、S7、S8通过一步退火法合成，所述单链S5、S6、S7、S8的序列分别如SEQIDNO.5、SEQIDNO.6、SEQIDNO.7、SEQIDNO.8所示；所述发夹H1、H2、H3、H4的序列分别如SEQIDNO.9、SEQIDNO.10、SEQIDNO.11、SEQIDNO.12所示；所述P链的长度为14nt，被锁定在发夹的茎结构中的部分P链长度为7nt；所述捕获探针CP1的序列如SEQIDNO.13所示，所述捕获探针CP2的序列如SEQIDNO.14所示；所述电极表面用捕获探针CP1修饰，所述电化学信号报告分子为六氨合钌。

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百度查询： 南方医科大学南方医院 用于检测外泌体miRNA的MDTs-CHA体系、电化学传感器及其应用