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申请/专利权人：广东第二师范学院
摘要：本发明公开了一种基于试管苗茎基部薄层细胞培养的白姜花转基因方法。该方法包括如下步骤：1将白姜花地下根状茎萌发的芽作为外植体，消毒后经不定芽诱导和生根成苗培养，获得试管苗；2待试管苗长至45～60d后，将试管苗茎基部切成薄片，经黑暗预处理获得预处理后的薄片；3将携带表达载体的阳性农杆菌重悬，然后将预处理后的薄片投入到没过薄片的菌体重悬液中进行侵染；4将侵染后的薄片进行不定芽诱导和成苗培养；5最后对试管苗进行筛选和鉴定，筛选出白姜花转基因植株。本发明采用薄层细胞培养，结合转基因技术，转化效率高，可以在较短时间内获得白姜花转基因植株，显著缩短了育种时间。
主权项：1.一种基于试管苗茎基部薄层细胞培养的白姜花转基因方法，其特征在于，包括如下步骤：1试管苗培育：将白姜花地下根状茎萌发的芽作为外植体，将其消毒后进行不定芽诱导和生根成苗培养，获得试管苗；2薄片制备和预培养：待步骤1中的试管苗长至45～60d后，将试管苗茎基部切成0.5～1.0mm厚度的薄层细胞切片，在薄层细胞预培养基中、黑暗条件下培养3～5d，得到预处理后的薄片；3菌液侵染薄片：将生长至对数期的携带表达载体的阳性农杆菌用含有乙酰丁香酮的MS培养基重悬菌体，得到菌体重悬液；然后将步骤2中得到的预处理后的薄片加入到没过薄片的菌体重悬液中，放在28℃、90～120rpmmin的条件下侵染15～30min，得到侵染后的薄片；4薄片的共培养与脱毒培养：将步骤3中得到的侵染后的薄片转入至共培养基中暗培养3～5d，再转入脱毒培养基中、黑暗条件下培养至出芽后，在光照下继续培养至成苗；5筛选和鉴定：提取步骤4中获得的试管苗进行潮霉素抗性标记筛选，获得抗性试管苗；然后提取抗性试管苗根、茎和或叶的基因组DNA，通过PCR检测，筛选出白姜花转基因植株。
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权利要求：
百度查询： 广东第二师范学院 一种基于试管苗茎基部薄层细胞培养的白姜花转基因方法
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