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申请/专利权人：万绵水
摘要：本发明涉及一种表皮干细胞的分离及培养方法，包括：取大于或等于预设大小的初始皮片，进行预处理得到第一中间皮片；进行清洗得到第二中间皮片；放入混合消化液中，并置于恒温摇床进行消化得到第三中间皮片，混合消化液包括胰蛋白酶和乙二胺四乙酸，其中胰蛋白酶的质量体积比为0.5％～1.25％，消化时间为45～90min；取出第三中间皮片，刮取解离细胞；收集解离细胞得到细胞悬液，进行离心，弃上清；利用完全无血清角质形成细胞培养基进行细胞重悬，得到重悬细胞培养液；将重悬细胞培养液置于用人胎盘Ⅳ型胶原铺板的培养皿中，按照预设时间进行换液，待细胞长满培养皿的70～80％进行传代培养。通过所述方法能够兼顾分离速度和分离比率，且能够提高细胞增殖能力。
主权项：1.一种表皮干细胞的分离及培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S100，取大于或等于预设尺寸的初始皮片并进行预处理得到第一中间皮片，所述预处理包括去除所述初始皮片的多余皮下脂肪、筋膜及血管，所述预设尺寸为大于8cm2；S200，对所述第一中间皮片进行清洗得到第二中间皮片；S300，将所述第二中间皮片放入混合消化液中，并置于恒温摇床进行消化得到第三中间皮片，所述混合消化液包括胰蛋白酶和乙二胺四乙酸，其中胰蛋白酶的质量体积比为0.5％～1.25％，消化时间为45～90min，所述恒温摇床的温度为37℃，每平方厘米初始皮片添加2-4ml所述混合消化液；S400，取出所述第三中间皮片，将所述第三中间皮片置于乳酸林格氏液培养皿中，使所述第三中间皮片的表皮背离所述乳酸林格氏液培养皿的底部，由上至下刮取解离细胞，所述解离细胞包括表皮细胞和真皮细胞；S500，收集所述解离细胞并分散于所述乳酸林格氏液培养皿中，得到细胞悬液，对所述细胞悬液进行离心处理，弃上清，保留沉淀的解离细胞；S600，将所述沉淀的解离细胞置于完全无血清角质形成细胞培养基中进行重悬，得到重悬细胞培养液；S700，将所述重悬细胞培养液置于预先用人胎盘Ⅳ型胶原铺板的培养皿中，按照预设时间进行换液处理，待细胞长至所述培养皿的70～80％进行传代培养。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 万绵水 一种表皮干细胞的分离及培养方法和细胞悬液
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