申请/专利权人：江苏大学

申请日：2022-04-24

公开（公告）日：2024-05-14

公开（公告）号：CN114910535B

主分类号：G01N27/36

分类号：G01N27/36;G01N27/327

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.14#授权;2022.09.02#实质审查的生效;2022.08.16#公开

摘要：本发明属于食品快速检测技术领域，具体涉及一种基于细胞电化学味觉传感器高灵敏快速检测α‑羟基山椒素的方法；该方法利用生物相容性良好、无毒的海藻酸钠‑明胶凝胶包裹HepG2活细胞，“编织”成一个特殊的三维网络结构，作为识别α‑羟基山椒素的特殊元件，当不同浓度α‑羟基山椒素存在时，将会对细胞造成不同程度的刺激，受体细胞上的膜受体TRPV1接触经由此将信号转导，从而导致细胞电信号发生改变，通过差分脉冲伏安法DPV检测三组的峰值电流，获得标准曲线实现对特定麻味物质的快速超灵敏检测。本发明方法灵敏度高、选择性好、响应迅速、成本低，可通过功能化修饰以实现对其他麻味物质的快速检测。

主权项：1.一种基于细胞电化学味觉传感器高灵敏快速检测α-羟基山椒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）选择电化学三电极体系：工作电极选择ITO导电玻璃；对电极选择铂丝电极；参比电极选择AgAgCl电极；（2）电极预处理：将ITO玻璃电极依次用丙酮、乙醇、超纯水超声浸泡后再用去离子水冲洗，氮气吹干，得到预处理后的ITO玻璃电极，即裸ITO工作电极；（3）采用特殊的原电位电化学合成法得到具有“树枝状”的金纳米粒子；具体操作为：将步骤（2）处理的裸ITO工作电极固定在电极夹上，铂电极作为参比电极，饱和AgAgCl电极作为对电极，同时浸泡在电解液中进行电沉积，得到Au@ITO电极，使用去离子水冲洗，氮气吹干，制备得到Au@ITO电极；所述电解液由HAuCl4、精氨酸和H2SO4组成，所述电解液中包含5molLH2SO4，7.5mmolLHAuCl4，150mmolL精氨酸；（4）将步骤（3）制备的Au@ITO电极使用H2SO4溶液进行活化；活化得到的Au@ITO电极经紫外照射灭菌后浸泡于L-Cys溶液中进行自组装，自组装完成后得到L-CysAu@ITO电极；（5）所述细胞为HepG2细胞，HepG2细胞培养条件：将HepG2细胞接种在DMEM培养基中进行培养，培养基中葡萄糖含量为4500mgL；并在培养基中添加占培养基体积10%的胎牛血清和1%的青链霉素双抗，于温度37℃、饱和湿度、CO2浓度5%的恒温培养箱中进行培养24-48h至细胞对数期；（6）制备海藻酸钠-明胶溶液，将海藻酸钠和明胶加入DMEM培养基中，37℃下搅拌1-3h直至溶解，静置过夜，得到与海藻酸钠-明胶溶液；然后取步骤（5）中对数生长期的细胞与海藻酸钠-明胶溶液充分混合获得海藻酸钠-明胶细胞复合物；（7）取步骤（6）所得的海藻酸钠-明胶细胞复合物涂布于步骤（4）所得的L-CysAu@ITO电极表面，再滴加氯化钙溶液，交联一定时间，得到稳定的三维结构；然后再经PBS清洗后转移到培养箱中培养，经培养后获得味觉传感器“信号电极”，记为海藻酸钠-明胶细胞L-CysAu@ITO电极；（8）利用DMEM培养基稀释α-羟基山椒素，制备不同浓度梯度的α-羟基山椒素溶液，将步骤（7）制得的海藻酸钠-明胶细胞L-CysAu@ITO电极在含有不同浓度α-羟基山椒素培养基中进行培养，培养后对其进行电化学差分脉冲伏安法，测得电化学电流峰值，以电信号电流值为纵坐标，以α-羟基山椒素溶液的浓度为横坐标，构建得到标准曲线；通过测定样品的电化学电流峰值，代入标准曲线，可以实现样品α-羟基山椒素溶液的浓度检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏大学 一种基于细胞电化学味觉传感器高灵敏快速检测α-羟基山椒素的方法

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