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申请/专利权人：郑州大学
摘要：本发明属于细菌生物学检测技术领域，具体地，涉及利用适配体和CRISPRCas12a系统对福氏志贺菌活菌进行检测的方法以及检测试剂盒。本发明提供的检测方法，先利用适配体的高亲和性，实现细菌检测的免提取与活菌检测，进一步在CRISPRCas12a的放大下，实现在免扩增的条件下进行高选择性检测。本发明的技术方案，既不需要进行菌种的DNA提取，也不需要进行靶基因的扩增，整个检测过程工艺操作简单、成本低，并且不依赖于大型仪器与专业人员，适合不发达偏远地区的现场检测。尤其是，本发明检测方法的检出限225CFUml左右，灵敏度和特异度高，且能够指示福氏志贺菌的活菌状态，在福氏志贺菌的活菌检测方面极具应用潜力。
主权项：1.利用适配体和CRISPRCas12a系统对福氏志贺菌活菌进行检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）对待检测的样品进行预处理，得到待测菌液；所述待检测的样品为福氏志贺菌活菌的菌株或者含有福氏志贺菌活菌的待鉴别样本；另准备杂交链；所述杂交链是通过适配体和阻断剂进行杂交制备得到；所述适配体的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述阻断剂的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；（2）将步骤（1）中所述杂交链与待测菌液进行置换反应，得到置换反应产物；（3）将步骤（2）所得置换反应产物作为检测物，将检测物加入到CRISPRCas12a检测系统中混匀，然后进行荧光检测；荧光检测后，根据是否释放荧光信号，判断待检测的样品中是否含有福氏志贺菌活菌；或者根据释放的荧光信号强度，判断待检测的样品中福氏志贺菌活菌的含量；所述CRISPRCas12a检测系统包括Cas12a蛋白、双标记荧光探针、crRNA、检测物；所述crRNA的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。
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权利要求：
百度查询： 郑州大学 利用适配体和CRISPR/Cas12a系统对福氏志贺菌活菌进行检测的方法以及检测试剂盒
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