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申请/专利权人：中国科学院亚热带农业生态研究所
申请日：2024-01-30
公开（公告）日：2024-05-31
公开（公告）号：CN118104616A
主分类号：A01K67/033
分类号：A01K67/033
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.06.18#实质审查的生效;2024.05.31#公开
摘要：本发明公开了一种利用混合菌种的改进食细菌线虫培养及扩繁方法，步骤是：A、取菌种配置混合物和线虫；B、将配置的菌种混合物接种入LB液体培养基，均匀涂布于NGM线虫生长固体培养基中，在培养箱中黑暗培养；C、在超净台内加5ml线虫清洗液，对线虫进行清洗；D、将清洗后的含有线虫的离心管离心，沉淀线虫后移去上清液，添加无菌水摇晃；E、重复步骤D，得到上清液；F、移去所得上清液，用移液枪将其中清洗后的线虫接种于NGM线虫生长培养基中；G、利用倒置显微镜观察培养基中线虫生长数量。通过对食细菌线虫的菌种混合物培养，对线虫进行培养，用于线虫的培养和扩繁。
主权项：1.一种利用混合菌种的改进食细菌线虫培养及扩繁方法，其特征在于，包括如下步骤：A、取菌种配置菌种混合物和线虫，所述菌种及其体积比为：费氏中华根瘤菌、大豆根瘤菌体积比为1：1；所述线虫为：秀丽隐杆线虫；B、将步骤A中配置好的菌种混合物接种入LB液体培养基，取200微升均匀涂布于NGM线虫生长固体培养基中，在25～28℃培养箱中黑暗培养48～72小时；C、取步骤A中的线虫，于24小时内，在离心机中2000～3000rpm1～3分钟，慢慢移去上清液至2ml，放入10ml的离心管中；D、在超净台内加5ml线虫清洗液，对步骤C所得的线虫清洗多次，得到清洗后的线虫；E、将步骤D清洗后的线虫以1300rpm30～60秒离心，沉淀线虫后移去上清液至2ml，添加无菌水至5ml摇晃30～60秒钟；F、重复步骤E3-4次，得到上清液；G、移去步骤F所得的上清液至0.5ml，用移液枪将清洗后的线虫接种于NGM线虫生长培养基中；F、利用倒置显微镜观察培养基中食细菌线虫生长数量；所述LB液体培养基配置方法为：在1L无菌水中加入蛋白胨10.0g、酵母膏粉5.0g、葡萄糖1.0g、pH为7.0±0.2；所述NGM线虫生长固体培养基配置方法为：在1L无菌水中加入2.5g蛋白胨、3.0g氯化钠、0.111g氯化钙、0.12g硫酸镁、0.005胆固醇、3.4g磷酸二氢钾、17.0g琼脂。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国科学院亚热带农业生态研究所 一种利用混合菌种的改进食细菌线虫培养及扩繁方法
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