申请/专利权人：南阳师范学院

申请日：2022-01-28

公开（公告）日：2024-06-04

公开（公告）号：CN114539396B

主分类号：C07K16/10

分类号：C07K16/10;C07K16/02;A61K39/42;A61K9/00;A61K9/50;A61K47/26;A61P1/12;A61P31/14

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.04#授权;2022.06.14#实质审查的生效;2022.05.27#公开

摘要：针对反刍动物的生理特点，为了解决卵黄抗体在瘤胃中消化、失活的问题，本发明创造性地提出了两种制剂方式，一种是肠道制剂，其能避免卵黄抗体经过瘤胃，研究表明，对于犊牛施用肠道制剂后，其能对于BEV感染导致的犊牛腹泻具有治疗作用，与传统的药物疗法效果接近，但是相比抗生素疗法更为环保、安全；另一种是过瘤胃制剂，其可以作为日粮精料的一部分添加，使用方便，将卵黄抗体制成过瘤胃制剂后，其能避免卵黄抗体在瘤胃中降解，并在肠道定点释放，对于BEV感染导致的腹泻具有治疗作用。

主权项：1.一种牛肠道病毒卵黄抗体过瘤胃制剂，其特征在于，所述牛肠道病毒卵黄抗体过瘤胃制剂在反刍动物的瘤胃中不易被降解，使卵黄抗体能顺利通过反刍动物的瘤胃和皱胃，并在小肠快速定点释放，所述牛肠道病毒卵黄抗体过瘤胃制剂用于对于BEV感染导致的腹泻的治疗；所述牛肠道病毒卵黄抗体过瘤胃制剂采用如下方法制备得到：步骤一，将琼扩效价为1:64的牛肠道病毒卵黄抗体溶液与β-环糊精按照质量比1:1的比例混合，搅拌均匀后进行真空冷冻干燥，低温粉碎后过200目筛，制备得到含水量低于8%的牛肠道病毒卵黄抗体粉；步骤二，将牛肠道病毒卵黄抗体粉与热保护剂-蔗糖、微晶纤维素、滑石粉按照5:1:3:1的质量比例混合均匀，按照质量体积比4:3的比例加入浓度为85%VV的乙醇溶液混合均匀制备得到软材；步骤三，采用制粒机将上述软材进行剪切、滚圆和烘干制备得到芯材；步骤四，将壳聚糖溶解于浓度为2%的乙酸溶液制备得到质量体积浓度为5%的壳聚糖溶液；而后将上述芯材加入空气流化床包衣机，喷入配制的质量体积浓度为5%的壳聚糖溶液作为内层包衣，其中芯材与壳聚糖溶液的质量比例为1:0.8，干燥后，过50目筛，即得到内层包衣芯材；步骤五，将棕榈油脂肪粉加热至100℃进行熔融，而后加入脂肪粉质量5%的滑石粉搅板均匀，冷却至80℃作为外层包衣溶液，而后将上述内层包衣芯材加入空气流化床包衣机，喷入配制的外层包衣溶液，内层包衣芯材与外层包衣溶液的质量比为1:1.2，干燥后，过20目筛，即得到牛肠道病毒卵黄抗体过瘤胃制剂；所述牛肠道病毒卵黄抗体是以牛肠道病毒1型EV-E-HN1817株制备得到的灭活疫苗免疫健康产蛋鸡制备得到，所述牛肠道病毒1型EV-E-HN1817株于2020年10月14日在中国典型培养物保藏中心CCTCC进行用于专利程序的培养物的保藏，其保存号为：CCTCCNo.V202071；所述牛肠道病毒卵黄抗体的制备方法包括如下步骤：步骤一免疫程序：（1）基础免疫：采用皮下注射的方式，健康产蛋鸡接种BEV灭活疫苗，每羽1.0ml；（2）加强免疫：基础免疫14日后，皮下注射BEV灭活疫苗，每只1.0ml；（3）强化免疫：加强免疫14日后，皮下注射BEV灭活疫苗，每只1.5ml；（4）维持免疫：在强化免疫接种后根据抗体效价，每隔2～3个月再加强接种1次，每只1.5ml；步骤二高免蛋收集：强化免疫接种结束后10日，每隔5日抽样测定高免蛋蛋黄中的抗体效价，当中和效价不低于1:256时，收集高免蛋，置10～15℃，应不超过10日；步骤三：采用辛酸-黄原胶法对蛋黄抗体进行提取和纯化：（1）蛋壳消毒：高免蛋浸入0.15%新洁尔灭水溶液中消毒15分钟，然后用甲醛熏蒸高免蛋30分钟；（2）蛋黄分离：打破蛋壳，除去蛋清、胚盘和系带，收集卵黄；（3）除脂：量取卵黄体积，加入灭菌玻瓶内，按其2体积量加入终浓度为0.1％黄原胶水溶液WV，混匀，并调至pH=5.2，置2～8℃静置16小时；（4）萃取：吸取并量取上清液体积，加入终浓度2％正辛酸vv，室温静置4小时，取上清液经过滤后，滤液调至pH=7.2；（5）过滤、浓缩：将加辛酸处理好的卵黄上清液用孔径为1.0μm和0.45μm的筒式滤芯过滤，再经截留分子量为100kDa的中空纤维超滤柱进行浓缩10倍；（6）灭活：按终浓度为0.05％加入甲醛溶液，充分搅拌混匀，室温灭活24小时；（7）半成品配制：将浓缩灭活卵黄抗体用pH=7.2的磷酸盐缓冲液稀释为琼扩抗体效价不低于1:8，再用孔径为0.22μm滤膜过滤除菌。

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权利要求：

百度查询： 南阳师范学院 一种牛肠道病毒卵黄抗体及制剂

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