申请/专利权人:东洋纺株式会社
申请日:2020-07-28
公开(公告)日:2024-06-28
公开(公告)号:CN114375342B
主分类号:C12Q1/70
分类号:C12Q1/70;C12Q1/686
优先权:["20190730 JP 2019-139565","20190730 JP 2019-139566"]
专利状态码:有效-授权
法律状态:2024.06.28#授权;2022.05.06#实质审查的生效;2022.04.19#公开
摘要:本发明的目的在于,提供利用单酶体系一步式RT‑PCR法从未进行离心分离操作且包含不溶物质的试样中检测RNA病毒的存在的手段。在一个实施方式中,本发明提供一种用于检测试样中的RNA病毒的存在的方法,其特征在于,包括以下工序:1制备混合液的工序,将事先未进行离心分离操作且包含不溶物质的试样、与包含分子量为5~500kDa的多肽和具有逆转录活性的耐热性DNA聚合酶的单酶体系一步式RT‑PCR反应液混合而制备混合液;以及,2将反应容器密闭后实施一步式RT‑PCR反应的工序。本发明的特征还在于,使用包含属于家族A的具有逆转录活性的耐热性DNA聚合酶的单酶体系一步式RT‑PCR反应液。
主权项:1.一种用于检测试样中的RNA病毒的存在的方法,其特征在于,包括以下工序:1制备混合液的工序,将事先未进行离心分离操作且包含不溶物质的试样、与包含分子量为5~500kDa的多肽和具有逆转录活性的耐热性DNA聚合酶的单酶体系一步式RT-PCR反应液混合而制备混合液,所述试样为选自粪便、呕吐物、唾液、血液和擦拭检测试样中的至少一种,或者为将所述选择中的至少一种悬浮于水、生理盐水或缓冲液而成的试样,所述试样事先未实施使RNA从病毒结构中露出的操作;以及,2将反应容器密闭后实施一步式RT-PCR反应的工序,所述工序2中包括在循环反应之前和或循环反应中实施热处理的操作,以将病毒破碎而使病毒内的核酸露出和或在核酸扩增反应中活化热启动酶。
全文数据:
权利要求:
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