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申请/专利权人：浙江理工大学;中南大学;浙江清肽生物科技有限公司
摘要：本发明公开的是一种酵母中必需基因的鉴定方法，包括如下步骤：构建第一步单交换的质粒；第一步单交换质粒构建完成后将阳性克隆菌株制备感受态；第二步单交换质粒构建；第二步单交换质粒转入第一步单交换菌株感受态细胞中，筛选获得阳性菌株；观察报告基因是否表达，表达则待测基因已成功敲除，若酵母株不再生长则该基因则为必需基因，本发明能够根据报告基因表达及菌株生长情况准确判断该基因是否为必需基因。
主权项：1.一种酵母中必需基因的鉴定方法，其特征在于鉴定方法包括如下步骤：步骤1单交换质粒构建：确定待测基因及其同源臂，将待测基因的3’同源臂、FLP重组酶、启动子、FRT序列、抗性筛选基因接入酵母诱导型表达载体，组成第一步单交换质粒；步骤2：在第一步单交换质粒同源臂上设计线性化引物进行质粒线性化，回收后电转至野生型X33酵母感受态细胞中，阳性克隆制备成感受态存储于-80℃冰箱中；步骤3：第二步单交换质粒构建：将待测基因的5’同源臂、Avi标签、荧光报告基因、抗性基因、FRT序列元件组合到酵母表达载体上，组成第二步单交换质粒；步骤4：在第二步单交换质粒同源臂上设计线性化引物进行质粒线性化，回收后电转至步骤2中制备完成的感受态细胞中以实现第二步单交换质粒转入第一步单交换菌株感受态细胞中；步骤5：挑选阳性克隆，诱导FLP表达并敲除待测基因；步骤6：荧光显微镜下观察报告基因是否表达，表达则待测基因已成功敲除，若酵母株不再生长则该基因则为必需基因。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江理工大学 中南大学 浙江清肽生物科技有限公司 一种酵母中必需基因的鉴定方法
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