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申请/专利权人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
申请日：2024-04-18
公开（公告）日：2024-06-07
公开（公告）号：CN118147334A
主分类号：C12Q1/689
分类号：C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/22
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.06.25#实质审查的生效;2024.06.07#公开
摘要：本发明公开了一种肺炎克雷伯菌和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌快速直接检测方法及试剂盒，该方法为：通过高温裂解酶裂解释放核酸，同时对UreD基因和blaKPC基因进行环介导核酸恒温扩增，再对荧光信号进行检测，得到检测结果。本发明首次采用耐高温裂解酶裂解肺炎克雷伯菌和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌释放核酸，从而完成菌液的直接一锅法LAMP扩增检测，无需基因组DNA的提取，整个检测过程只需一步操作，具有操作简单、耗时短、灵敏度高、特异性强、不依赖大型实验设备等优势；这些优势使得本发明开发的基于LAMP核酸恒温扩增技术的方案能够方便用于基层实验和临床一线对肺炎克雷伯菌和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的基层快速检测和鉴定诊断。
主权项：1.一种肺炎克雷伯菌和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌快速直接检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、采集待测菌液样本；S2、肺炎克雷伯菌检测：采用含有用于扩增肺炎克雷伯菌特有的UreD基因的第一扩增引物组和含有用于裂解细菌的裂解酶的第一扩增体系对待测菌液样本进行恒温扩增，然后通过荧光检测判断样品中是否有UreD基因，若UreD基因检测结果为阳性，则判定待测菌液样本中含有肺炎克雷伯菌，并进行下一步，否则判定不含肺炎克雷伯菌，并结束检测；S3、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌检测：采用含有用于扩增肺炎克雷伯菌特有的blaKPC基因的第二扩增引物组和含有用于裂解细菌的裂解酶的第二扩增体系对待测菌液样本进行恒温扩增，然后通过荧光检测判断样品中是否有blaKPC基因，若blaKPC基因检测结果为阳性，判定待测菌液样本中含有耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌，否则判定不含耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌，完成检测；其中，第一扩增体系和第二扩增体系的扩增温度相同，且在该温度下所述裂解酶保持有裂解活性。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 肺炎克雷伯菌和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌快速直接检测方法及试剂盒
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