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申请/专利权人：黄淮学院;华高生物科技有限公司

摘要：本发明涉及一种吗啡免疫荧光层析快检试纸条、制备方法及其检测方法，包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸和胶板。本发明的吗啡荧光免疫快检试纸条采用免疫竞争的原理，吗啡和吗啡抗原共同竞争结合垫上的与荧光微球偶联的吗啡抗体，当裂解液中吗啡含量依次增加时则需要更多的抗体与之结合，故可与T线上抗原结合的抗体的含量则减少，T线的亮度减弱，C线为质检线，亮度不随吗啡含量的增减而变化。本发明的吗啡免疫荧光快检试纸条具有体积小、质量轻、便于携带、分析速度快、操作步骤简单等优点，打破了传统检测方法的局限性。对样本量庞大的现场快速检测提供了有力的技术支持。同时也给公安人员对于现场毒品缉查和检测带来了极大的便利。

主权项：1.一种吗啡免疫荧光层析快检试纸条，其特征在于：包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸和胶板，所述的结合垫的制备方法包括以下步骤：1将结合垫置于结合垫浸泡液中浸泡2小时，取出浸泡好的结合垫置于烘箱中在45度下烘干2小时备用；2荧光微球的活化步骤：取荧光微球超声5分钟，取超声好的荧光微球100微升加1mlPH＝5.0，浓度0.05molLMES溶液混合均匀，13000rmin离心20min，弃上清液，再加1ml0.05molLMES混合均匀超声5分钟，13000rmin离心20min，弃上清液，加200微升0.05molLMES溶液混合均匀，超声5分钟，用0.05molLMES溶液配制NHS10mgml，取15微升加入超声好的荧光微球中，再用纯水配制EDC15mgml取2微升加入到上述荧光微球中，用锡箔纸包裹避光摇床反应15分钟；3荧光微球与吗啡抗体偶联物的制备：取100微升每毫克的吗啡抗体20微升加入活化后的荧光微球中混合均匀，避光摇床反应2h，加入10微升0.1molL的乙醇胺溶液混合均匀，避光摇床反应30min后13000rmin离心10min，弃上清夜，用500微升微球稀释液混合均匀，所述的微球稀释液中含有0.01molLPBS和1％BSA，超声5分钟，避光摇床反应1h，13000rmin离心10min，弃上清液，用200微升的微球稀释液混合均匀，超声5min，在2～8度下保存；4取出微球吗啡抗体偶联物超声5分钟，取超声好的微球抗体偶联物1微升加入100微升的喷金稀释液配制成喷金混合液，将稀释好的喷金混合液再次超声5分钟让微球抗体偶联物充分的混合均匀，并防止微球抗体偶联物的聚集，取出超声好的喷金混合液，采用XYZ三维喷金划线仪，以1微升每厘米的速度在处理好的结合垫上进行喷金，将喷金后的结合垫置于烘箱中在45度下烘干1小时备用；所述的结合垫浸泡液为PH=7.4的0.05molL的Tris-HCL缓冲溶液，其中包含5%的海藻糖、0.5%BSA和0.1%Tween；所述的喷金稀释液配方中包含：30mmolLPBS、0.05％PEG20000、1％BSA、0.01％SDS、10％蔗糖和3％吐温；所述的样品垫为CB06、SB06、RB45、KB50或SB08，所述的结合垫为VL98、VL78或SAP-Z70，所述的NC膜为JJ140或CN140，所述的吸水纸为CH37、SH27、CH27或SH37，所述的胶板为PVC、SM31-40、SMNF31-40或SMA31-40。

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