申请/专利权人：山东悦翔生物有限公司

申请日：2023-10-08

公开（公告）日：2024-06-07

公开（公告）号：CN117568176B

主分类号：C12N1/06

分类号：C12N1/06;C07C51/44;C07C51/50;C07C57/03;C07C67/54;C07C69/587;C12P7/6434;C12R1/645;C12R1/89

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.07#授权;2024.03.08#实质审查的生效;2024.02.20#公开

摘要：本发明提出了一种基于微藻提炼的提取DHA的工艺，属于DHA提取技术领域。将裂壶藻和球等鞭金藻经过酶助发酵后，加入乙醇沉淀，制得藻多糖，滤液分层，得到富含DHA的毛油，通过固定化脂肪酶催化酶解，进行分子蒸馏，得到DHA藻油；将蛋白粉发酵制得抗氧化蛋白肽；将乳清分离蛋白、藻多糖、抗氧化蛋白肽和DHA藻油加入水中，均质，加入阿拉伯胶，调节溶液pH值，反应冷却，微胶囊沉降，制得包埋DHA的微胶囊。通过本发明方法提取的DHA提取率高，纯度高，工艺简单，几乎不含运EPA，制备成包埋DHA的微胶囊，不仅避免了DHA的氧化分解，提高了食用口感，同时，DHA包埋率高，营养价值高。

主权项：1.一种基于微藻提炼的提取DHA的工艺，其特征在于，具体包括以下步骤：S1.复合藻的酶助发酵：将10-12重量份裂壶藻和5-7重量份球等鞭金藻干燥，粉碎，得到的干粉，将10-15重量份干粉加入100-120重量份水中，加入1-2重量份复合酶，40-45℃酶解1-3h，灭菌，接种活化的枯草芽孢杆菌菌种种子液和活化的地衣芽孢杆菌菌种种子液，接种量分别为2-3vv%和1-2vv%，所述菌种种子液的含菌量为108-109cfumL，40-42℃，50-70rmin，酶助发酵36-48h，过滤，得到发酵产物，滤渣干燥，作为饲料；所述复合酶为纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶，质量比为3-5:2-3:2-3；S2.醇沉：向步骤S1中的发酵产物中加入乙醇至体系乙醇含量为70-80wt%，静置沉淀6-8h，过滤，得到藻多糖；滤液静置分层1-3h，收集有机相，得到富含DHA的毛油，水相冷冻干燥，得到藻营养物质，作为营养食品；S3.固定化脂肪酶的制备：将16-16.4重量份氯化铁和12.5-12.7重量份氯化亚铁溶于100重量份水中，氮气保护下加入10重量份22-25wt%的氨水，加热至50-60℃，搅拌反应3-5h，离心，制得磁性四氧化三铁粒子，将15-20重量份磁性四氧化三铁粒子加入100重量份水中，加入17-22重量份多巴胺盐酸盐和2-3重量份催化剂，加热至40-45℃，搅拌反应3-4h，离心，洗涤，干燥，制得改性磁性四氧化三铁粒子，将10重量份改性磁性四氧化三铁粒子加入100重量份水中，加入3-5重量份复合脂肪酶，搅拌反应30-40min，挥干溶剂，制得固定化脂肪酶；所述催化剂为pH=8.5-9的Tris-HCl溶液；所述复合脂肪酶为米黑毛霉菌脂肪酶、皱褶假丝酵母脂肪酶的混合物，质量比为5-7:10；S4.脂肪酶催化反应：向100重量份步骤S2制得的富含DHA的毛油中加入5-7重量份步骤S3制得的固定化脂肪酶，加热至35-40℃，搅拌酶解2-4h，磁铁分离，回收固定化脂肪酶，得到酶解滤液；S5.分子蒸馏纯化：将步骤S4制得的酶解滤液加入分子蒸馏装置中，加热蒸馏，收集未蒸馏出的物质，制得DHA藻油；所述分子蒸馏的条件为进料预热温度27-32℃，冷凝水20-30℃，系统操作压力0.2-0.4Pa，蒸馏温度235-245℃，进料速率1.5-2.5mL／min，刮膜器转速100-200rmin；S6.抗氧化蛋白肽的制备：将15-22重量份蛋白粉加入100重量份水中，灭菌，接种活化的发酵菌菌种种子液为活化的保加利亚乳杆菌和瑞士乳杆菌菌种种子液，接种量分别为3-4vv%和1-2vv%，所述菌种种子液的含菌量为108-109cfumL，36-39℃，50-70rmin，发酵48-60h，分离，冷冻干燥，制得抗氧化蛋白肽；所述蛋白粉为大豆分离蛋白和酪蛋白粉，质量比为10-12：7-10；S7.包埋：将25-30重量份乳清分离蛋白溶于200重量份水中，加入3-5重量份步骤S2制得的藻多糖、5-7重量份步骤S6制得的抗氧化蛋白肽和17-22重量份步骤S5制得的DHA藻油，12000-13000rmin均质5-10min，加入17-25重量份阿拉伯胶，混合均匀后，调节溶液pH值为3.7-3.8，搅拌反应30-50min，2-5℃冷却，微胶囊沉降1-2h，离心，洗涤，干燥，制得包埋DHA的微胶囊。

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