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申请/专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日：2021-11-05
公开（公告）日：2024-06-07
公开（公告）号：CN114107380B
主分类号：C12N15/85
分类号：C12N15/85;C12N15/90;C12N15/67;C12N15/65;C12N5/10;C12Q1/6888;C12R1/91
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.07#授权;2022.03.18#实质审查的生效;2022.03.01#公开
摘要：本发明公开一种CHO‑S.attp重组细胞株的构建方法和应用，构建方法主要包括以下步骤：将attp位点序列和GFP报告基因构建到含有PCDNA3.3载体，将带有attB位点序列和目的蛋白基因构建到pcDNA5载体，Bxb1重组酶基因构建到POG44载体；将所得的含有attp质粒转染CHO‑S细胞，抗生素筛选，FACS检测，获得CHO‑S.attp细胞池；利用所得细胞池，进行有限稀释，加压筛选单克隆，通过FACS检测，获得CHO‑S.attp细胞株；将attb和目的基因质粒与Bxb1重组酶共转染CHO‑S.attp细胞株，加压筛选，FACS检测，获得阳性率高，表达量高，稳定性好的细胞系。本发明具有耗时短，表达量高，阳性率高，稳定性好等优点，可直接用于抗体筛选，并可以提高抗体筛选的质量，加速后续的抗体体外研发进程。
主权项：1.一种CHO-S.attp重组细胞株作为宿主细胞构建目的基因细胞系的方法，其特征在于，包括以下步骤：1质粒构建：将attp位点序列和GFP报告基因构建到含有PCDNA3.3载体，共用CMV启动子；将带有attB位点序列和目的蛋白基因构建到pcDNA5载体，Bxb1重组酶基因构建到POG44载体；attp序列为GGTTTGTCTGGTCAACCACCGCGGACTCAGTGGTGTACGGTACAAACC；attb的序列为CCGGCTTGTCGACGACGGCGGACTCCGTCGTCAGGATCATCC。2培养CHO-S.attp细胞；3电穿孔转染：细胞计数，离心后弃掉上清；4重悬细胞，加入质粒至细胞悬液中，对细胞悬液进行电穿孔，然后细胞转入摇床进行培养；5FACS检测细胞的转染效率，同时对细胞进行加压筛选，加入抗生素之后的每2-3天查看细胞生长情况，直至细胞活率恢复至90％，进行FACS检测。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 上海药明生物技术有限公司 一种CHO-S.attp重组细胞株及其构建方法和应用
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